Espectrometría de masas por infusión directa para mapear rápidamente el flujo metabólico de sustratos marcados con isótopos estables
Resumen
La espectrometría de masas de alta resolución por infusión directa (DI-HRMS) permite el perfilado rápido de mezclas complejas de metabolitos en sangre, líquido cefalorraquídeo, muestras de tejido y células cultivadas. Aquí presentamos un método DI-HRMS adecuado para la determinación rápida de flujos metabólicos de sustratos marcados isotópicamente en células cultivadas y organoides. Adaptamos un proceso de anotación automatizado seleccionando los aductos marcados que mejor representan la mayoría de 13C y/o 15Intermediarios glucolíticos y del ciclo del ácido tricarboxílico marcados con nitrógeno, así como varios de sus derivados. Además, se incluyeron valina, leucina y varios de sus productos de degradación. Demostramos que la espectrometría de masas de alta resolución con ionización por desorción isotópica (DI-HRMS) puede determinar alteraciones previstas e imprevistas en los flujos metabólicos a lo largo de estas vías, resultantes de la alteración genética de enzimas metabólicas individuales, como la piruvato deshidrogenasa (PDHA1) y la glutaminasa (GLS). Asimismo, permite identificar con precisión las adaptaciones metabólicas a la pérdida de la metilmalonil-CoA mutasa en organoides hepáticos derivados de pacientes. Nuestros resultados resaltan el potencial de la DI-HRMS, en combinación con compuestos marcados isotópicamente estables, como un método de cribado eficiente para la fluxómica.
Advion Interchim Científico® TriVersa NanoMate® (Advion, Ithaca, NY).
