Espectrometría de masas por infusión directa para mapear rápidamente el flujo metabólico de sustratos marcados con isótopos estables
Resumen
La espectrometría de masas de alta resolución por infusión directa (DI-HRMS) permite la rápida caracterización de mezclas complejas de metabolitos en sangre, líquido cefalorraquídeo, muestras de tejido y células cultivadas. Presentamos un método de DI-HRMS adecuado para la determinación rápida de los flujos metabólicos de sustratos marcados isotópicamente en células cultivadas y organoides. Adaptamos un proceso de anotación automatizado seleccionando los aductos marcados que mejor representan la mayoría de los intermediarios del ciclo de los ácidos glucolíticos y tricarboxílicos marcados con C y/o N, así como varios de sus derivados. Además, se incluyeron valina, leucina y varios de sus productos de degradación. Demostramos que la DI-HRMS puede determinar alteraciones anticipadas e imprevistas en los flujos metabólicos a lo largo de estas vías, resultantes de la alteración genética de enzimas metabólicas individuales, como la piruvato deshidrogenasa (PDHA1) y la glutaminasa (GLS). Además, permite identificar con precisión las adaptaciones metabólicas a la pérdida de la metilmalonil-CoA mutasa en organoides hepáticos derivados de pacientes. Nuestros resultados destacan la eficacia de la DI-HRMS, en combinación con compuestos marcados con isótopos estables, como método de cribado eficaz para la fluxómica.
Advion Interchim Científico® Triversa® NanoMate® (Advion, Ithaca, NY).