Publicación

Cromatografía líquida de fluidez mejorada: una guía para escalar de separaciones analíticas a preparativas

 

Merck & Co.

Resumen

La evolución de la instrumentación de cromatografía de fluidos supercríticos (SFC), la capacidad de detección mejorada y el rango de modificadores ampliado ha llevado a extender el alcance de SFC al análisis de un espectro más amplio de analitos más allá de las separaciones enantioselectivas. Sin embargo, la SFC preparativa aún no ha experimentado la misma revitalización tecnológica, especialmente en lo que respecta a la purificación de analitos altamente polares. Se ha demostrado que la cromatografía líquida de fluidez mejorada (EFLC) es una de las formas de ampliar el rango aplicable de la instrumentación SFC a analitos altamente polares como proteínas, carbohidratos y nucleótidos. A pesar de las aplicaciones recientes de EFLC para desafiar mezclas de metabolitos y análogos hidrófilos, se desconoce su viabilidad en la purificación preparativa, que es de gran importancia para la industria farmacéutica. Aquí, se investigaron múltiples parámetros cromatográficos que son críticos para lograr métodos de purificación EFLC factibles, incluida la presión del sistema en función de la composición del modificador (para varios MeOH: H2Proporciones O), efecto de las condiciones de inyección del diluyente en la forma del pico y optimización de la carga de masa con la composición del diluyente. El uso de diluyentes de acetonitrilo o metanol al 50% proporcionó la mayor capacidad de carga volumétrica. En el caso de la sacarosa, el aprovechamiento de una mayor solubilidad del analito en agua resultó ser más favorable que la capacidad de carga volumétrica de los diluyentes con mayor contenido orgánico. De hecho, fue posible una inyección de 80 mg de sacarosa en una columna HILIC preparativa de 2 cm con una degradación mínima de la forma del pico. La información combinada condujo a la demostración exitosa de EFLC para la separación preparativa de azúcares utilizando instrumentación SFC dirigida por MS fácilmente disponible.