Síntesis de multienzimas encerradas en membrana (MEME) de derivados del ácido 2,7-anhidro-siálico
Marie Monestier, Dimitrios Latousakis, Andrew Bell, Sandra Tribal, Louise E. Tailford, Ian J. Colquhoun, Gwenaelle Le Gall, Hai Yu, Xi Chen, Martin Rejzek, Simone Dedola, Robert A. Field, Nathalie Juge
El ácido 2,7-anhidro-alfa-N-acetilneuramínico natural (2,7-anhydro-Neu5Ac) es un producto de transglicosilación de trans-sialidasas intramoleculares bacterianas (sialidasas IT). Se ha establecido un enfoque fácil de una sola olla y dos enzimas para la síntesis de derivados del ácido 2,7-anhidro-siálico, incluidos los que contienen diferentes formas de ácido siálico como Neu5Ac y ácido N-glicolilneuramínico (Neu5Gc). El enfoque se basa en el uso de Ruminoccocus gnavus IT-sialidase para la liberación de ácido 2,7-anhidro-siálico a partir de glucoproteínas, y la conversión de ácido siálico libre por una aldolasa de ácido siálico. Este método sintético, que se basa en una síntesis enzimática encerrada en la membrana, se puede realizar a escala preparativa. Usando fetuin como sustrato, se obtuvo una producción de alto rendimiento y rentable de 2,7-anhydro-Neu5Ac con alta pureza. Este método también se aplicó a la síntesis de 2,7-anhydro-Neu5Gc. La estrategia de multienzimas encerradas en la membrana (MEME) descrita aquí proporciona un enfoque eficiente para producir una variedad de derivados de ácido siálico.
El análisis de MS se realizó con Advion Expression® CMS ESI.