Imágenes de espectrometría de masas nativas de proteínas intactas y complejos de proteínas en secciones de tejido delgado con la tecnología Advion TriVersa NanoMate® LESA®
Rian L. Griffiths, Emma K. Sisley, Andrea F. Lopez-Clavija, Anna L. Simmonds, Iain B. Styles, Helen J. Cooper
Aquí, los investigadores presentan imágenes de espectrometría de masas de análisis de superficie de extracción líquida nativa (LESA) de proteínas y complejos de proteínas del cerebro y el hígado del ratón. Las proteínas intactas se detectaron en estados característicamente bajos de carga, lo que indica que las proteínas permanecen plegadas. En el cerebro, se detectaron abundantes proteínas como la ubiquitina y la β timosina 4 en todo el tejido, mientras que otras proteínas, como la neurogranina, se localizaron en regiones anatómicas específicas.
En el hígado, se demuestra la formación de imágenes de un complejo proteico (hemoglobina tetramérica), así como la proteína de unión a ácidos grasos. Curiosamente, el uso de disolventes de tipo nativo permite la extracción de proteínas que no se han observado previamente en experimentos con LESA que emplean disolventes desnaturalizantes, es decir, se puede aplicar LESA nativa para ampliar el rango de proteínas observadas. Además, se presenta la espectrometría de movilidad de iones LESA nativa y muestra que las secciones transversales de colisión de proteínas extraídas de tejido pueden determinarse mediante espectrometría de movilidad de iones de onda viajera. La sección transversal de colisión del ion 5 + de ubiquitina se calculó como 1047 Å2, en buen acuerdo con las mediciones de soluciones estándar de proteína ubiquitina. También se calcularon secciones transversales de colisión para los iones 4 + de β-timosina 4, β-timosina 10 y dos proteínas no identificadas, junto con la de un ion 10 + de una proteína no identificada de peso molecular 15660 Da.
Para la espectrometría de masas y las imágenes de espectrometría de masas, las muestras se introdujeron en el espectrómetro de masas a través de nanoESI utilizando un TriVersa NanoMate® (Advion Biosciences, Ithaca, Estados Unidos). La ubicación exacta a muestrear se seleccionó utilizando el LESA® Software de puntos (Advion).
