Análisis de sensibilidad de ésteres de ácidos grasos de hidroxiácidos grasos en extractos lipídicos biológicos mediante lipidómica de escopeta tras derivatización en un solo paso
Resumen
Los ésteres ramificados de ácidos grasos de hidroxiácidos grasos (FAHFA) constituyen una importante familia de lípidos endógenos con funciones antidiabéticas y antiinflamatorias. Por lo tanto, el análisis de FAHFA en muestras biológicas obtenidas en condiciones de salud y enfermedad permite revelar los mecanismos subyacentes de diversos trastornos relevantes (p. ej., diabetes y enfermedades autoinmunes). Hasta la fecha, debido a su extremadamente baja abundancia, la determinación de los niveles alterados de estas especies sigue siendo un gran desafío, a pesar de los grandes esfuerzos realizados mediante cromatografía líquida-espectrometría de masas en tándem con o sin derivatización. En este trabajo, describimos un nuevo método para el análisis de FAHFA presentes en extractos lipídicos de muestras biológicas tras la extracción en fase sólida y la derivatización química con una especie auténtica de FAHFA como estándar interno, basado en los principios de la lipidómica shotgun basada en espectrometría de masas multidimensional. El enfoque presentó una marcada sensibilidad, alta especificidad y un amplio rango dinámico lineal de más de 3 órdenes de magnitud sin efectos de matriz evidentes. Además, después de la derivatización química, las masas moleculares de los FAHFA cambian de una región superpuesta con especies de ceramida a una nueva región sin superposiciones, eliminando estas señales contaminantes de las ceramidas y, por lo tanto, reduciendo los resultados falsos de los FAHFA. Finalmente, este novedoso método se aplicó con éxito para determinar los niveles de FAHFA en variedades de muestras biológicas representativas, incluyendo plasma de individuos delgados y con sobrepeso/obesidad de normoglucemia, y muestras de tejido (como hígado y tejido adiposo blanco de ratones diabéticos (db/db)). Revelamos alteraciones significativas de los FAHFA en muestras bajo condiciones pato(fisio)lógicas en comparación con sus respectivos controles. En conjunto, el método desarrollado podría contribuir en gran medida al estudio de los niveles alterados de FAHFA bajo una variedad de condiciones biológicas/biomédicas, y facilitar la comprensión de estas especies lipídicas en el proceso pato(fisio)lógico.
Gráficamente abstracto
Advion Interchim Científico® Triversa NanoMate® (Advion, Ithaca, NY).