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Incorporación específica de sitio de fosfotirosina usando un código genético expandido

 

Christian Hoppmann, Allison Wong, Bing Yang, Shuwei Li, Tony Hunter, Kevan M. Shokat, Lei Wang

El acceso a las fosfoproteínas con un estado de fosforilación estequiométrico y específico del sitio es clave para comprender el papel de la fosforilación de proteínas. Aquí presentamos un método eficiente para generar proteínas puras y activas que contienen fosfotirosina codificando genéticamente un análogo estable de fosfotirosina que es convertible en fosfotirosina nativa. Demostramos su compatibilidad general con proteínas de diversos tamaños, sitios y funciones de fosfotirosina, y revelamos un posible papel de la fosforilación de tirosina en la regulación negativa de la ubiquitinación.

El análisis de MS se realizó con Advion Expression® CMS ESI.