Collection de fractions dirigées en masse de produits naturels : exemples de curcuma et d'extrait de thé vert

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Introduction

Les produits naturels ont été une source d'inspiration pour la découverte préclinique de médicaments à la fois en explorant les médecines traditionnelles et en découvrant de nouveaux espaces en pharmacologie. L'isolement et la caractérisation des produits naturels restent un obstacle majeur à la découverte de médicaments. L'isolement est généralement effectué à une échelle analytique, puis les composés sont entièrement caractérisés avant toute tentative de purification à plus grande échelle. La capacité de purifier des composés dans des mélanges de produits naturels complexes par des données MS hautement spécifiques permet de simplifier les étapes de purification et de caractérisation du processus. Ici, la chromatographie flash et préparatoire est couplée à la détection MS pour purifier les produits naturels dans les extraits de thé vert et de curcuma. 

Méthodologie

L'isolement des principales catéchines du thé vert et des principaux curcuminoïdes du curcuma a été réalisé via des extractions. Les feuilles de thé vert ont été extraites et le matériau brut a été analysé à l'aide d'UPLC-MS et de normes analytiques pour identifier les catéchines d'intérêt et développer une méthode de préparation-LC appropriée pour l'isolement. La poudre de curcuma a été extraite puis analysée par TLC-MS à l'aide d'Advion's Plate Express pour identifier les composés d'intérêt et développer une méthode de chromatographie flash appropriée pour l'isolement. Les deux extraits ont été purifiés à l'aide de la collecte de fractions dirigées vers la masse à l'aide du système de chromatographie flash/prep puriFlash 5.250 d'Interchim connecté à l'ex d'Advion.Pression® spectromètre de masse quadripolaire unique. Les composés cibles ont été détectés à l'aide des canaux XIC MS. La pureté des composés isolés a ensuite été déterminée par HPLC-MS.

Données préliminaires

Nous avons pu isoler avec succès les 3 principaux curcuminoïdes (curcumine, déméthoxycurcumine et bisdéméthoxycurcumine) du curcuma et les 5 principales catéchines du thé vert ((-)-épigallocatéchine (EGC), (-)-épicatéchine (EC), (-) -épigallocatéchine-3-gallate (EGCG), (-)-épicatéchine-3-gallate (ECG) et (-)-gallocatéchine gallate (GCG) de haute pureté (≥95%).   

Une méthode de chromatographie flash isocratique (97:3 DCM:MeOH) a été développée en utilisant la CCM (97:3 DCM:MeOH) pour purifier les curcuminoïdes. La plaque TLC a été analysée par APCI- SM à l'aide du Plate Express qui extrait les taches directement de la plaque sans avoir besoin de préparer l'échantillon. Les fractions ont été collectées à l'aide de canaux de chromatogramme ionique extrait (XIC) avec APCI- MME. Les fractions ont ensuite été caractérisées par ASAP- La MS et la pureté de chaque fraction ont été déterminées par HPLC-MS. 

Une méthode LC préparative a été développée pour les catéchines dans le thé vert en utilisant HPLC-MS et des normes de référence pour identifier chaque composé d'intérêt. Utilisation d'un gradient d'eau méthanol et collecte de fractions à l'aide de canaux XIC définis pour les composés d'intérêt. Les fractions ont été caractérisées et leur pureté déterminée par HPLC-MS. Les fractions EGC, EGCG, GCG et ECG ont été déterminées comme ayant des puretés de 100 %, 99.8 %, 98.8 et 100 % respectivement.