Purification des peptides: Couplage Flash-MS à l'aide du puriFlash 5.250P et de l'expression CMS
Afin de s'adapter, Interchim a mis en place un laboratoire pour pouvoir réaliser des démonstrations en ligne. Ces démonstrations peuvent s'articuler autour de purifications de produits «standards» afin de démontrer le potentiel de nos instruments. Cet exemple montre les capacités d'un système flash-ms avec Interchim puriFlash 5.250 et Advion expression CMS Spectromètre de masse compact (CMS) pour la purification d'un peptide.
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Pour la purification d'un peptide issu de la synthèse chimique, nous avons utilisé le puriFlash 5.250P. Pour suivre cette purification, nous avons utilisé un détecteur UV et Advion expression CMS .
La détection des peptides par spectrométrie de masse se fait avec une source ESI, idéale pour la détection de grosses molécules comme les peptides. Une petite quantité de produit est «détournée» par l'interface MS pour la détection.
Analyse d'injection de flux (FIA)
Injection directe d'échantillon brut sur l'expression CMS .
Voici les spectres de masse résultants:
On observe un pic à de m / z 643, qui correspond à la molécule de l'intérêt chargé 3 fois (M + 3H)3+, ainsi qu'un pic à de m / z 964.3, qui correspond à la molécule d'intérêt chargée 2 fois (M + 2H)2+.
Conditions HPLC
Voici les résultats:
Transposition et purification
Une colonne peptidique avec une colonne préparative a été utilisée: PFB5C18T-150/212.
Tout d'abord, la méthode HPLC analytique a été transposée à une méthode HPLC préparative.
Ensuite, la concentration de l'échantillon injecté a été augmentée pour pouvoir purifier la quantité maximale du produit en un seul passage.
Grâce au système puriFlash 5.250P couplé à l'expression CMS CMS, le produit d'intérêt a été purifié et collecté en fonction de sa masse.