Chromatographie liquide à fluidité améliorée: un guide pour passer de la séparation analytique à la séparation préparative
Merck & Co.
Abstract
L'évolution de l'instrumentation de chromatographie en fluide supercritique (SFC), une capacité de détection améliorée et une gamme de modificateurs élargie ont conduit à étendre la portée du SFC à l'analyse d'un spectre plus large d'analytes au-delà des séparations énantiosélectives. Cependant, le SFC préparatif n'a pas encore connu la même revitalisation technologique, en particulier en ce qui concerne la purification des analytes hautement polaires. La chromatographie liquide à fluidité améliorée (EFLC) a été démontrée comme l'un des moyens d'étendre la gamme applicable de l'instrumentation SFC aux analytes hautement polaires tels que les protéines, les glucides et les nucléotides. Malgré les applications récentes d'EFLC pour des mélanges difficiles de métabolites et analogues hydrophiles, sa viabilité dans la purification préparative, qui est d'une grande importance pour l'industrie pharmaceutique, reste inconnue. Ici, plusieurs paramètres chromatographiques qui sont essentiels pour obtenir des méthodes de purification EFLC réalisables ont été étudiés, y compris la pression du système en fonction de la composition du modificateur (pour plusieurs MeOH: H2O ratios), effet des conditions d'injection du diluant sur la forme du pic et optimisation de la charge massique avec la composition du diluant. L'utilisation de diluants à 50% d'acétonitrile ou de méthanol a fourni la capacité de charge la plus volumétrique. Dans le cas du saccharose, une plus grande solubilité de l'analyte dans l'eau s'est avérée plus favorable que la capacité de charge volumétrique des diluants à teneur organique plus élevée. En fait, une injection de 80 mg de saccharose était possible sur une colonne préparative HILIC de 2 cm avec une dégradation minimale de la forme du pic. Les informations combinées ont conduit à la démonstration réussie d'EFLC pour la séparation préparative des sucres à l'aide d'une instrumentation SFC dirigée par MS facilement disponible.