Analyse sensible des esters d'acides gras d'acides gras hydroxylés dans des extraits lipidiques biologiques par Shotgun Lipidomics après dérivatisation en une étape
Abstract
Les esters d'acides gras ramifiés d'acides gras hydroxylés (FAHFA) constituent une importante famille de lipides endogènes, possédant des propriétés antidiabétiques et anti-inflammatoires. Par conséquent, l'analyse des FAHFA dans des échantillons biologiques prélevés en conditions saines et pathologiques peut révéler les mécanismes sous-jacents de diverses pathologies (par exemple, le diabète et les maladies auto-immunes). Jusqu'à présent, en raison de leur très faible abondance, la détermination des variations de concentration de ces espèces reste un défi majeur, malgré les efforts considérables déployés en utilisant la chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse en tandem avec ou sans dérivatisation. Nous décrivons ici une nouvelle méthode d'analyse des FAHFA présents dans des extraits lipidiques d'échantillons biologiques après extraction en phase solide et dérivatisation chimique avec une espèce authentique de FAHFA comme étalon interne, basée sur les principes de la lipidomique shotgun basée sur la spectrométrie de masse multidimensionnelle. Cette approche présente une sensibilité marquée, une spécificité élevée et une large plage dynamique linéaire de plus de 3 ordres de grandeur, sans effets de matrice évidents. De plus, après dérivatisation chimique, les masses moléculaires des FAHFA se déplacent d'une région chevauchée par des espèces de céramides vers une nouvelle région sans chevauchement, supprimant ces signaux contaminants des céramides et réduisant ainsi les faux résultats des FAHFA. Enfin, cette nouvelle méthode a été appliquée avec succès pour déterminer les niveaux de FAHFA dans divers échantillons biologiques représentatifs, notamment le plasma de personnes minces et en surpoids/obèses normoglycémiques, et des échantillons de tissus (tels que le foie et le tissu adipeux blanc de souris diabétiques (db/db)). Nous avons révélé des altérations significatives des FAHFA dans les échantillons en conditions patho(physio)logiques par rapport à leurs témoins respectifs. Prise dans son ensemble, la méthode développée pourrait grandement contribuer à l'étude des niveaux altérés de FAHFA dans diverses conditions biologiques/biomédicales, et faciliter la compréhension de ces espèces lipidiques dans le processus patho(physio)logique.
Résumé graphique
Advion Interchim Scientifique® Triversa NanoMate® (Advion, Ithaca, NY) a été utilisé.