Incorporation de phosphotyrosine spécifique à un site à l'aide d'un code génétique étendu
Christian Hoppmann, Allison Wong, Bing Yang, Shuwei Li, Tony Hunter, Kevan M. Shokat, Lei Wang
L'accès à des phosphoprotéines présentant un statut de phosphorylation stoechiométrique et spécifique à un site est essentiel pour comprendre le rôle de la phosphorylation de protéines. Nous rapportons ici une méthode efficace pour générer des protéines actives pures et actives contenant de la phosphotyrosine en codant génétiquement un analogue stable de la phosphotyrosine pouvant être converti en phosphotyrosine native. Nous démontrons sa compatibilité générale avec des protéines de différentes tailles, sites et fonctions de phosphotyrosine, ainsi que le rôle possible de la phosphorylation de la tyrosine dans la régulation négative de l'ubiquitination.
L'analyse MS a été réalisée à l'aide d'Advion Expression® CMS ESI.
