Advion Interchim Scientific AVANT™ HPLC および ex を使用したイオヘキソールの分析 expression CMS^® CMSシステム

概要

イオヘキソールは、X 線分析のコントラストを向上させる、広く使用されている非イオン性造影剤です。 その低い浸透圧は、腎臓を介した迅速なクリアランスを可能にし、再吸収とさらなる代謝を防ぎます^【1]. これにより、イオヘキソールは他の造影剤と比較して安全性プロファイルが優れた化合物になります^【2]. 

多くの臨床イメージング アプリケーションでは、造影剤/造影剤が患者に投与され、スキャンのコントラストと空間分解能が向上します。 造影剤の毒性と副作用のため、安全な使用と正確な診断のために、既知の濃度で調製し、純度を分析することが非常に重要です。 

このアプリケーション ノートでは、イオヘキソール分析のためのシンプルで正確な HPLC-CMS メソッドを紹介します。

方法

メソッドのセットアップ

アプリケーションで使用したすべての溶媒は HPLC グレードでした。

Sigma Aldrich から XNUMX つのイオヘキソール標準を入手しました。

99.99 つは純度 95% の認定標準物質で、もう XNUMX つは純度が XNUMX% 以上でした。

すべての実験は、Advion Interchim Scientific exで実行されました expression CMS^® 表 1 に示すパラメータを持つ AVANT™ UHPLC システムと組み合わせたコンパクト質量分析計。

テーブル1: HPLC/MS法

イオヘキソールのHPLC/UV/MS分析

室温では、イオヘキソールは HPLC/UV/MS 分析で検出された XNUMX つのピークで異性化します。 

これらの 1 つのピーク (図 XNUMXA) は、イオヘキソールの中央のベンゼン環に結合したかさばるヨウ素原子によるアニリド N-アセチル基の妨害された回転に由来します。 これらの XNUMX つの化合物は本質的に「回転異性体」であり、水溶液中で室温でゆっくりと入れ替わります。

両方のピークは、821.9 で同じ m/z を示す MS 分析で確認され (図 1B および 1C)、インソース CID 質量スペクトルに違いは見られませんでした (図 2A および 2B)。 

両方の回転異性体は、X 線分析における化合物の毒性とイメージング能力の向上に寄与するため、このアプリケーション ノートでは、両方のピークの合計を以降のイオヘキソール分析に使用します。 

図1: (A) イオヘキソールの HPLC クロマトグラム (254 nm)、(B) m/z 821.8 でのプロトン化イオヘキソールの抽出イオン クロマトグラム、(C) RT 4.06 分でのピークからの平均 MS スペクトル。

図2: (A) RT 3.61 分でのピークからの平均インソース CID 質量スペクトル、(B) RT 4.06 分でのピークからの平均インソース CID 質量スペクトル。

HPLC/UV分析による純度測定

イオヘキソール サンプルの HPLC レスポンスを、同様の濃度のイオヘキソール認定標準のレスポンスと比較することにより、サンプルと認定標準のピーク面積比から、濃度と純度を迅速に分析できます。 

イオヘキソールの濃度比を計算する式を以下に示します。

イオヘキソール サンプルと認定参照の HPLC クロマトグラムを図 3A と 3B に示します。

合計された 714 つのピーク面積の平均値は、イオヘキソール サンプルでは 3 (図 740A)、イオヘキソール参照標準では 3 (図 0.0964B) です。 濃度比の計算では、サンプル中のイオヘキソールの計算濃度は 96.4 mg/ml であり、これは 95% の純度に相当します。

図3: (A) イオヘキソール サンプル (254 mg/ml) の HPLC クロマトグラム (0.1 nm) (B) イオヘキソール参照標準 (254 mg/ml) の HPLC クロマトグラム (0.1 nm)。

HPLC/UV分析による定量

イオヘキソールサンプルの純度をより正確に確認するために、25 ～ 500 μg/mL の 0.9999 つの異なる希釈レベルと各濃度で 4 回の注入を使用して、イオヘキソール認定標準物質の検量線を作成しました。 得られた線形キャリブレーション関数の R 二乗値は XNUMX (図 XNUMX) で、優れた直線性を示しています。 

イオヘキソール キャリブレーション カーブ アプローチにより、イオヘキソール サンプルの純度は 97.5% であると決定されました。 

この値は、サンプルの最低 95% の記載された純度のすぐ上でもあり、イオヘキソール サンプルとイオヘキソール参照標準の直接 UV 応答比分析による測定値とはわずか 1.1% しか異なりません。

認定された参照標準物質が利用できる場合、校正機能または直接 UV 応答比分析による純度決定の両方を、UV 吸光度のある有機化学物質に使用できます。

キャリブレーション関数法は、より正確な測定を提供します。

図4：HPLCクロマトグラム（254 nm）によるイオヘキソールの検量線

まとめ

Advion Interchim Scientific AVANT™ (U)HPLC システムは、イオヘキソールで示されているように、造影剤の純度分析のための正確なクロマトグラフィー法を提供できます。 UHPLC と Advion Interchim Scientific ex の結合 expression CMS^® コンパクト質量分析計は、ターゲット化合物の質量と質量による確認を提供するだけでなく、 インソースのフラグメンテーションパターンだけでなく、不純物の迅速な測定も可能にします。 

参考文献
^【1] T. Almen、非イオン性造影剤の開発、Invest. ラジオル。 (1985) 調査放射線学。 1985、20(1)、S2-S9。
^【2] RD Moore、EP Steinberg、NR Powe、RI White、JA Brinker、EK Fishman、SJ Zinreich、CR Smith、高浸透圧造影剤によって誘発される副作用の頻度と決定要因、放射線学。 1989, 170, 727-32.