概要

分析技術と方法論的ツールの改善は、天然物研究における生物活性二次代謝産物の特性評価と分離において重要な役割を果たします。 逆相液体クロマトグラフィー-質量分析（RP-LC-MS）は、分析レベルでの複雑な天然抽出物の代謝物プロファイリングに広く使用されており、バイオマーカーのターゲットMS分離にますます使用されています。 順相クロマトグラフィー（NP-LC）は、極性二次代謝産物の精製に最適であり、低い操作圧力や最も安価な固定相など、RPと比較していくつかの利点もあります。

ただし、NP-LCは通常、MSカップリングには適していません。 Advion X Interchimで、一般的な分離メソッドを使用した分取スケールでの代謝物精製に対するNP-LC-APCI-MSの可能性が調査されました。 PuriFlash®–CMSシステム 親油性二次代謝産物のターゲットMS分離への応用を考慮して。 XNUMXつの代表的な無極性天然物の混合物を使用して、実際の分離ケースを模倣した条件で分離、分割、およびMSイオン化を最適化しました。 最後に、Angelicaarchangelicaのジクロロメタン根抽出物の無極性成分の分離に成功しました。

順相フラッシュCMSによる代表的な無極性天然物混合物の迅速な分離

12gおよび25gの順相フラッシュカラムでの天然物混合物の精製

XNUMXつの市販の標準（カリオフィレンオキシド、ケリン、およびアルファサントニン）を使用して、粗植物抽出物から親油性化合物を迅速に精製するためのツールとしてのpuriFlash-CMSシステムの適用性を評価しました。

XNUMXつのクロマトグラムは、UV信号とMS信号の重なりが良好な、XNUMXつのカラムサイズでの急激なグラジエントを伴う分取スケールでの混合プロファイルを示しています。

すべてのパラメータは、分離と検出の両方のために注意深く最適化されました。 良好な検出と

特定の化合物のFlash-MSガイド精製

ポストカラムメークアップポンプ希釈のスキーム

puriFlash-CMSシステム

順相からの溶媒はAPCI源に対して非常に可燃性であり、加熱プロセスのために避ける必要があります。

効率的で安全なイオン化を行うには、最適化されたポストカラム希釈が必須でした。 MS検出器に到達したときの溶媒混合物は、ACNまたはMeOHのいずれかで99％を超えていました。

最適化されたスプリット条件と適切な溶媒のポストカラム溶出によるAPCI-MS検出は、堅牢で、このタイプの精製に適していることがわかりました。

Angelicaarchangelica根抽出物の順相puriFlash-CMS精製

分析用HPLC-UV

分析スケール：

準備スケール：

フラッシュ分取UV-ELSD-MS

Angelica archangelicaのルーツは、クマリン誘導体が豊富です。 UV検出に加えてMS-ELSD検出により、発色団がないか弱い二次代謝産物のモニタリングが可能になり、MSの選択性は、部分的に共溶出する化合物の正確な収集に大いに役立ちました。

まとめ

順相フラッシュ精製は、代謝物プロファイリングの結果に基づいて、特定の親油性バイオマーカーまたは生物活性化合物を合理的に分離するための効率的な戦略です。 標準のUV検出に加えて、MSでトリガーされる分画とELSDモニタリングは、正確な収集と分離された化合物の量の推定のための強力なツールです。 MSは、特定のコレクションに特に役立ちます。 m / z 高負荷および低ピーク容量のクロマトグラフィー手法を使用して粗抽出物で頻繁に発生する共溶出の場合。

この迅速で合理的なアプローチは、合成混合物と天然混合物のシングルステップ精製と分離に広く使用できます。 また、天然物研究で非常に一般的な発色団を欠く無極性化合物の検出にも対応しています。 分取スケールで実行される分離により、数十から数百mgの化合物を精製して、それらの生物活性のさらなる構造的同定と評価を行うことができます。

参考文献

ダビデ・リギ¹、Antonio Azzollini¹、エマーソンフェレイラケイロス¹、Jean-Luc Wolfender¹
ジュネーブ大学薬学部、ローザンヌ大学、30 Quai Ernest-Ansermet、1211ジュネーブ4、スイス
[1] Davy Guillarme、Dao TT Nguyen、Serge Rudaz、Jean-Luc Veuthey、Eur。 J.ファーマバイオ医薬品。 2008、68、430

puriFlash-CMSの詳細