使用 Advion Interchim Scientific AVANT™ HPLC 和 ex 分析碘海醇expression^® CMS系统

介绍

碘海醇是一种广泛使用的非离子成像剂，可提高 X 射线分析的对比度。 其低渗透压允许通过肾脏快速清除，防止重吸收和进一步代谢^[1]. 与其他显像剂相比，这使得碘海醇成为一种具有更好安全性的化合物^[2]. 

在许多临床成像应用中，成像剂/造影剂被施用于患者以提高扫描的对比度和空间分辨率。 由于显像剂的毒副作用，其已知浓度的制剂及其纯度分析对其安全使用和准确诊断非常重要。 

在本应用简报中，介绍了一种用于碘海醇分析的简单而准确的 HPLC-CMS 方法。

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方法设置

应用中使用的所有溶剂均为 HPLC 级。

两种碘海醇标准品购自 Sigma Aldrich。

一种是纯度为 99.99% 的有证标准物质，第二种标称纯度≥ 95%。

所有实验均在 Advion Interchim Scientific ex 上进行expression^® 紧凑型质谱仪与 AVANT™ UHPLC 系统联用，其参数如表 1 所示。

表1: HPLC/MS 方法

碘海醇的 HPLC/UV/MS 分析

在室温下，碘海醇会异构化，在其 HPLC/UV/MS 分析中检测到两个峰。 

这两个峰（图 1A）来自苯胺 N-乙酰基的受阻旋转，这是由于碘海醇的中心苯环上附着的庞大碘原子所致。 这两种化合物本质上是“旋转异构体”，在室温下在水溶液中缓慢交换。

两个峰均通过 MS 分析确认，在 821.9 处显示相同的 m/z（图 1B 和 1C），并且在它们的源内 CID 质谱中没有可见差异（图 2A 和 2B）。 

由于这两种旋转异构体都有助于化合物在 X 射线分析中的毒性和成像增强能力，因此两个峰的总和将用于本应用简报中任何进一步的碘海醇分析。 

图1：(A) 碘海醇的 HPLC 色谱图 (254 nm)，(B) 质子化碘海醇的提取离子色谱图，m/z 821.8，(C) 室温 4.06 分钟处峰的平均 MS 谱图。

图2：(A) RT 3.61 分钟处峰值的平均源内 CID 质谱，(B) RT 4.06 分钟处峰值的平均源内 CID 质谱。

通过 HPLC/UV 分析进行纯度测定

通过将碘海醇样品的 HPLC 响应与相似浓度的碘海醇认证标准品的响应进行比较，样品与认证标准品的峰面积比可以提供快速的浓度和纯度分析。 

碘海醇浓度比的计算公式如下：

碘海醇样品和认证参比样品的 HPLC 色谱图如图 3A 和 3B 所示。

碘海醇样品的两个峰面积之和的平均值为 714（图 3A），碘海醇参考标准品为 740（图 3B）。 经浓度比计算，计算出样品中碘海醇的浓度为0.0964 mg/ml，纯度为96.4%，符合产品标称纯度≥95%。

图3: (A) 碘海醇样品 (254 mg/ml) 的 HPLC 色谱图 (0.1 nm) (B) 碘海醇参考标准品 (254 mg/ml) 的 HPLC 色谱图 (0.1 nm)。

通过 HPLC/UV 分析进行定量

为了更准确地检查碘海醇样品的纯度，使用 25 至 500 μg/mL 的五个不同稀释水平和每个浓度三次重复进样创建了碘海醇认证标准物质的校准曲线。 所得线性校准函数的 R 平方值为 0.9999（图 4），显示出出色的线性度。 

通过碘海醇校准曲线法，确定碘海醇样品的纯度为 97.5%。 

该值也恰好高于样品的最低 95% 的规定纯度，并且与碘海醇样品与碘海醇参考标准的直接 UV 响应比分析的测量值仅相差 1.1%。

如果有经过认证的参考标准物质，通过校准函数或直接 UV 响应比分析的纯度测定都可用于具有 UV 吸光度的有机化学品。

校准函数方法将提供更准确的测量。

图4: 碘海醇的 HPLC 色谱图 (254 nm) 校准曲线

结论

Advion Interchim Scientific AVANT™ (U)HPLC 系统可以为成像剂的纯度分析提供准确的色谱方法，如碘海醇所示。 将 UHPLC 与 Advion Interchim Scientific ex 联用expression^® 紧凑型质谱仪不仅通过其质量和 源内碎裂模式，还可以快速测定杂质。 

参考文献：
^[1] T. Almen，非离子造影剂的开发。，投资。 放射线。 (1985) 调查放射学。 1985, 20(1), S2-S9。
^[2] RD Moore、EP Steinberg、NR Powe、RI White、JA Brinker、EK Fishman、SJ Zinreich、CR Smith，高渗透压造影剂引起的不良反应的频率和决定因素。放射学。 1989, 170, 727-32。