puriFlash-MS在正常相条件下的天然产物靶向分离

介绍

分析技术和方法工具的改进在天然产物研究中表征和分离生物活性次生代谢产物中起着重要作用。 反相液相色谱-质谱(RP-LC-MS)被广泛用于分析水平的复杂天然提取物的代谢物谱分析,并且越来越多地用于生物标志物的目标MS分离。 正相色谱法(NP-LC)非常适合纯化极性次级代谢产物,与RP相比,它们还具有一些优势,例如低操作压力和最便宜的固定相。

但是,NP-LC通常不适用于MS偶联。 已在Advion X Interchim上研究了使用通用分离方法制备规模的NP-LC-APCI-MS代谢物纯化的潜力 PuriFlash®– CMS系统 鉴于其可用于亲脂性次生代谢物的目标MS分离。 在模拟实际隔离情况的条件下,使用三种代表性的非极性天然产物的混合物来优化分离,分裂和MS电离。 最后,成功分离了当归二氯甲烷根提取物的非极性成分。

通过正相Flash-CMS快速分离代表性的非极性天然产物混合物

在12 g和25 g正相快速色谱柱上纯化天然产物混合物

三种市售标准品(石竹烯氧化物,凯尔琳和α-桑顿宁)用于评估puriFlash-CMS系统作为从粗植物提取物中快速纯化亲脂性化合物的工具的适用性。

四个色谱图显示了制备规模的混合物曲线,在两个色谱柱尺寸上具有快速梯度,并且UV和MS信号具有良好的重叠。

所有参数均经过仔细优化,以进行分离和检测。 采取了特别谨慎的措施来寻找电离和分裂条件,以提供良好的检测和

Flash-MS指导的给定化合物的纯化

柱后补水稀释方案

puriFlash-CMS系统

对于APCI来源,正相溶剂高度易燃,由于加热过程应避免使用。

为了获得有效和安全的电离,必须对柱后进行优化稀释。 当到达MS检测器时,溶剂混合物的ACN或MeOH浓度均> 99%。

发现APCI-MS检测具有最佳的分离条件,并在柱后进行了适当溶剂的洗脱是可靠的,并且非常适合此类纯化。

当归当归根提取物的正相puriFlash-CMS纯化

分析型HPLC-UV

分析规模:

制备规模:

闪光制备型UV-ELSD-MS

当归的根富含香豆素衍生物。 除了紫外检测外,MS-ELSD检测还可以监测无或弱发色团的次生代谢物,而MS的选择性对于精确收集部分共洗脱化合物非常有帮助。

总结

正相快速纯化代表了一种有效的策略,可基于代谢物谱分析结果合理分离特定的亲脂性生物标志物或生物活性化合物。 除标准的紫外线检测外,MS触发的分馏和ELSD监测是用于精确收集和估算分离出的化合物数量的强大工具。 MS对于任何给定的特定集合特别有用 m / z 如果使用高载量和低峰容量色谱方法在原油提取物中经常发生共洗脱。

这种快速而合理的方法可广泛用于一步纯化和分离合成和天然混合物。 它也可用于检测缺乏发色团的非极性化合物,这在天然产物研究中非常常见。 以制备规模进行的分离可以纯化数十至数百毫克的化合物,以进行进一步的结构鉴定和生物活性评估。

參考資料

戴维·里吉(Davide Righi)1安东尼奥·阿佐利尼1,爱默生·费雷拉·奎洛兹1,让·卢克·沃尔芬德1
日内瓦大学药学院,洛桑大学,奎伊·内斯特·安塞梅特大街30号,1211日内瓦4,瑞士
[1] Davy Guillarme,Dao TT Nguyen,Serge Rudaz,Jean-Luc Veuthey,Eur。 J. Pharma。 生物制药。 2008,68,430

肽纯化:使用puriFlash 5.250P和表达CMS进行Flash-MS偶联

为了适应,Interchim成立了一个实验室,可以进行在线演示。 这些演示可以围绕“标准”产品的纯化进行阐述,以展示我们仪器的潜力。 本示例演示了具有Interchim puriFlash 5.250和Advion ex的flash-ms系统的功能。离子 紧凑型质谱仪(CMS)用于纯化肽。

装置

为了纯化化学合成产生的肽,我们使用了puriFlash 5.250P。 为了监测这种纯化,我们使用了紫外线检测器和Advion ex离子 CMS。

通过质谱检测肽段是使用ESI离子源进行的,这对于检测大分子(如肽段)非常理想。 少量产品被MS接口“转移”以进行检测。

流动注射分析(FIA)

防爆样品直接进样离子 CMS。

这是所得质谱图:

我们观察到一个峰值 m / z 643,对应于带电3倍的感兴趣分子(M + 3H)3+以及的峰值 m / z 964.3,对应于充电2次(M + 2H)的目标分子2+.

HPLC条件


结果如下:

转座与纯化

使用带有制备柱的肽柱: PFB5C18T-150 / 212。

首先,将分析型HPLC方法转换为制备型HPLC方法。

然后,增加注射样品的浓度,以便能够在一次运行中纯化最大量的产品。

感谢puriFlash 5.250P系统与ex离子 CMS,目标产物基于其质量进行纯化和收集。

通过智能闪蒸纯化实现更好的化学反应

<<单击此处以查看我们的最新白皮书:
简化的纯化流程突破了有机合成的瓶颈>>

我们都去过那里:您想做一个简单的Flash纯化。

很简单,对吧?

然后,您开始准备反应混合物,考虑进行反应监控,确认产品,开发Flash方法...

这篇文章重点介绍了一些使Flash纯化比以往更容易的方法。 阅读有关反应监控,纯化和馏分ID的提示。

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预先Flash运行:正在执行(和监测)你的反应
一开始,您将面临多项决策–这些决策可以使简单的纯化过程变成半天的样品制备过程,并在您等待LC / MS结果时浏览社交媒体。

您需要做出的第一个决定是如何快速轻松地制作化合物并将该化合物传递到Flash系统。 Pronto!

提示1:减少等待时间。
如果您认为“ LC / MS最好!” 您可能需要重新考虑。 使用TLC等替代技术,可以更快,更轻松地完成反应监控。 考虑一下您真正需要的东西–快速回答,“我做了我的化合物吗?” 尝试使用实验室中拥有的最简单(甚至是基本)技术,以最简单的方式找到答案。

提示2:减少样品制备。
如果您选择使用LC / MS上的TLC路由(Bravo!)来监视反应,那么在您和Flash运行之间仍然要走几步。 即,刮擦点的烦恼,将其准备在溶剂中直接注入质谱仪中。 这可能是探索市场上其他可用技术的机会,例如TLC读板器。 这项新技术为您提供了TLC板的按键式分析。 无刮擦。 没有样品准备。 没有清理。 只需要几秒钟。

想象一下–您只需按一下按钮,您的反应就完成了,您感兴趣的化合物也被识别了!

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在Flash运行期间:使用手边的工具
令人高兴的是,(通常)技术在我们这一边。 得益于AI和自动运行以及几种乏味的化学过程的“一劳永逸”的思想,我们幸运地发展到了许多行业领先的专家为您完成工作的时代。

提示3:简化Flash方法的开发。
在Flash中进行方法开发时会遇到一些问题,除非您是专家,否则您可能并不确定。 您的Rf值是多少? 您应该选择哪一列? 如果您的Flash系统具有简化建议方法细节的方法开发的能力,那么它是一个很好的起点,可以帮助您的常规纯化顺利进行。

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Flash运行后:确定分数

您已经经过净化,并且对到目前为止所做的工作充满信心。 希望您花了所有时间来监控反应和准备方法,并且确信让Flash系统为方法开发提供帮助。 但是现在呢? 终于该淘汰旧的LC / MS了吗?

提示4:简化分数ID
没有一种识别化合物的方法。 正如我们之前所了解的,TLC是LC / MS监测反应的理想替代品。 现在,我们从另一个角度看待它–如何快速识别管中的馏分而又不浪费您的宝贵时间?

Advion ASAP液体和固体探针之类的工具是理想的选择。 将简单探针浸入其中一个试管中,然后插入质谱的APCI离子源中。 这允许进行无准备的采样,这是跳过LC / MS的另一种方法。

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有任何提示(或头痛)要添加到此列表吗? 给我们发电子邮件 info@advion.com 让自己出名! 我们很高兴将您与我们团队中的Flash专家联系起来。

对简化的TLC到Flash到ASAP工作流程系统感兴趣吗? Advion x Interchim当前通过购买质谱仪提供免费的Flash系统。 单击此处以了解有关最新特别优惠的更多信息。

视频更多您的风格? 在我们的最新片段中观看完整的Flash工作流程,从反应到分数:

组合的原子和分子(CAM)电离:液体采样的多样性–大气压辉光放电

作者: 泰勒·威廉姆斯1,雅各布·比尔(Jacob R.1杰米·琼斯2和R. Kenneth Marcus1
1克莱姆森大学化学系,克莱姆森,南卡罗来纳州29634
2Advion Inc,伊萨卡,纽约14850

质谱技术通常分为两个不同的领域:原子和分子。 液体采样–大气压辉光放电(LS-APGD)已开发为一种多功能的电离源,能够进行原子和分子(CAM)组合分析。 迄今为止,LS-APGD已在多种仪器平台上的U同位素比分析和分子分析中显示出令人印象深刻的结果.1-3虽然已在此来源上证明了分子采样,但这些样品属于ESI领域型样品,较大的极性化合物,最常与LC相关的药物靶标。 此处将展示使用Advion ex作为CAM电离源的LS-APGD的更广泛的多功能性离子 紧凑型质谱仪(CMS)。

该海报在ASMS 2020 Reboot上展示。

这项研究还发表在《分析原子光谱杂志》(JAAS)*上。
*本文不是开放获取。

Advion COVID-19更新:致力于科学–致力于您

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此致

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教学实验室的质谱

质谱教学:基础知识

制定任何课程的课程都是费力的:讲座内容,实验材料,带回家的小包等等。

我们Advion的团队了解到,虽然对您的学生讲授质谱法可能是您的首要任务,但如果没有大量准备,您可能并没有准备好这样做。 这就是为什么我们开发了一个包含以下内容的教学包的原因:

  • 离子® 紧凑型质谱仪(CMS)–一种简单易用的教学仪器,其性能可支持您自己的研究
  • ESI 以及 APCI 电离技术
  • 易于使用的样品入口技术,例如 板块快递 自动TLC读板器,一键式 ASAP液体和固体探针
  • 过度 10小时的录制讲座 来自行业专家和Advion联合创始人Jack Henion博士
  • 讲座幻灯片 分享或适应自己的教学风格
  • 简单,直观,学生友好 CheMS软件

从入门的质谱原理到深入的研究项目,Advion的教学包提供了向化学家教授质谱必不可少的大量实践经验。

 

详细了解简单易用的无前处理样品引入技术,这些技术可通过ex离子 CMS对教授和学生均具有刺激性和易用性:

 

Plate Express按钮式TLC读板器

•将Plate Express TLC读板器连接到ex离子 CMS用于按键式TLC板分析

•无需刮擦或样品制备

•在不到1分钟的时间内识别斑点

 

 

ASAP大气固体分析探针

•ASAP探头非常适合学生使用,可为无需准备的液体和固体样品提供最简单的样品入口技术

•将探头插入质谱仪以在几秒钟内获得答案

 

 

LC / CMS –学习(U)HPLC的基础

•通过添加Advion AVANT(U)HPLC系统获得LC / MS方面的专业知识,或连接ex离子 使用我们的集成软件选项将CMS转换为实验室当前的LC

 

 

CheMS软件可简化用户体验

•快速选择要分析的化合物的工作流程和类型,而无需成为质谱专家

•简便的方法和仪器设置,适用于多种样品引入技术

 

 

 

ex离子 CMS

离子 CMS是专为化学家而设计的研究级台式质谱仪。 当不上课时,该系统是支持研究项目的理想选择。 借助电喷雾电离(ESI)和大气压化学电离(APCI)源以及大分子的扩展质量范围选件,ex离子 CMS是一款易于使用的多功能质量检测器,适用于各种研究应用以及教学实验室。 它的易用性,多功能性和一键式软件使ex离子 CMS非常适合本科生和研究生教学化学课程。

 

 

综合讲座材料

由康奈尔大学名誉教授,杰克·亨尼恩(Jack Henion)博士和领先的化学系共同开发,该教学软件包中包含了有关质谱的现成课程。 按原样共享或适应您的教学风格。 该课程包括预先录制的讲座和附带的幻灯片,内容涉及质谱学,样品进样技术的基础知识,以及化学工作场所中用于动手学习的实际示例。 讲座包括:

  • 质谱学简介
  • 流动注射分析,ESI和APCI电离技术
  • 液体和固体直接分析探针(ASAP)
  • Plate Express TLC读板器
  • Touch Express开放端口采样接口(OPSI)
  • LC / MS技术
  • 其他CMS应用程序和技术

全面的反应监测和流化学资源

我做我的化合物了吗?“

 

这是一个常见的短语,可能每天都会在实验室中跟踪您。 由于对时间敏感的反应以及对时间敏感的确认数据的需求,快速的反应监测对于寻求最简化的日常工作流程的化学家至关重要。

离子 紧凑型质谱仪(CMS)满足了有机和合成化学家对淬灭反应混合物的最佳时间的需求。 他们可以在数分钟而不是数小时或数天内获得答案。 此外,多种进样口技术(如大气样品分析探针(ASAP),Plate Express TLC读板器,直接进样等)为样品分析提供了最终的灵活性,而无需进行复杂的样品制备。 另外,使用前离子 CMS在流动化学应用中是理想的反应监控工具。

在此综合资源指南中了解有关快速反应监控的基本工具的更多信息:

 

白皮书:紧凑型质谱–完整的反应监测解决方案

•根据您的化合物了解不同的样品技术和电离方法

•了解无准备的30二次分析如何使您的实验室受益

•了解用于快速反应监测的优化流动化学工具如何减轻长时间运行的高分辨率仪器的负担

 

 

网络研讨会:自优化流体反应器,克里斯·霍巴克维斯基,利兹大学

•了解间歇化学和流动化学的优缺点

•了解连续流化学过程中的在线分析如何使反应得到实时监控,从而实现立即表征和优化能力

 

 

应用说明:使用Plate Express和ex对溶液相肽合成进行实时反应监测离子 TLC / CMS

•了解如何结合使用薄层色谱(TLC)和紧凑型质谱(CMS)是化学家克服合成难题并优化化学反应的简单快捷方法

•了解如何通过快速,连续的溶液相合成策略轻松合成具有药用价值的肽

 

 

 

应用说明:在紧凑型质谱仪上通过直接分析探针分析两种反应产物

•了解如何通过一次滑动即可将液体或固体引入质谱图中,从而在几秒钟内即可完成反应监测结果

•了解如何使用带有CMS的ASAP来识别可能存在两种产物的反应产物

 

 

 

应用说明:使用TLC接口的紧凑型质谱仪监控Suzuki反应

•了解如何使用Advion ex进行在线薄层色谱TLC / CMS技术离子 紧凑型质谱仪(CMS)和Plate Express™接口tLC分离后无需样品制备即可提供化合物结构信息

 

 

 

出版物:一种基于互联网的新型化学合成反应监测,控制和自主优化平台 (开放获取)

•了解前离子 CMS已集成到由剑桥大学莱伊实验室开发的新工作流中,该工作流提供了模块化软件系统,使研究人员可以使用Internet上的来自世界各地的任何设备来监视和控制化学反应。

 

 

 

出版物:通过机器学习控制有机合成机器人以寻找新的反应性 (开放获取)

•使用Advion ex离子 紧凑型质谱仪以及机器人技术和AI的发展,了解如何比手动进行更快地进行化学反应。 仅通过少量实验,开发不仅可以带来好处,而且还可以预测可能的试剂组合的反应性

 

 


 

BONUS SOFTWARE网络研讨会:质谱的新进展– Peak Express

•确定您是否使用新型质谱图(ΔS)制成了化合物。 获得专利的ΔS能够超越化学噪声,并自动检测甚至最小的峰,而无需了解 m / z

•如何通过单击按钮实时或通过后处理轻松找到加合物,二聚体,片段,副反应和其他意外化合物

•如何使用Peak Express软件突出显示复杂混合物和肮脏基质中的次要成分,并使您能够控制质量导向的纯化而无需提供化合物的质量

•如何在扫描整个质量范围时轻松获取XIC质量数据,从而使Peak Express™告诉您 m / z

 

AI机器人混合化学物质以发现反应–出版物和视频

发布警报: 通过机器学习控制有机合成机器人以寻找新的反应性
JarosławM. Granda,Liva Donina,Vincenza Dragone,De-Liang Long和Leroy Cronin / Nature,在线发布2018 7月18

使用Advion ex离子 紧凑型质谱仪以及机器人技术和AI的发展,了解如何比手动进行更快地进行化学反应。 仅进行少量实验后,开发不仅可以提高速度,还可以预测可能的试剂组合的反应性。


视频快讯: 不仅在《自然》杂志上发表了这一进展,还提供了一个有关正在运行的系统的视频:

记者Adam Levy与化学家Lee Cronin谈论他的团队的搜索1 用于新的化学反应。

“当你让实验室里的化学家去发现一些事情时,这是非常困难的。 这有点像要求某人现在乘船去找一个新的大陆,“克罗宁说。

加入我们的网络研讨会:自我优化的连续流反应器

与我们一起参加来自利兹大学的Chris Horbaczewskyj和Advion的首席科学创始人Jack Henion的网络研讨会,26年2018月XNUMX日,星期四。Chris正在使用在线质谱技术进行连续流反应的自我优化。 连续流和工艺优化是化学合成中相对较新的方法。 该网络研讨会概述了利兹大学Bourne小组的流程开发应用程序的工作流程。

注册此网络研讨会以了解更多信息!

自优化连续流反应器网络研讨会

加入我们,与利兹大学的Chris Horbaczewskyj和Advion的首席科学创始人Jack Henion举行网络研讨会,时间为26年2018月10日星期四美国东部标准时间/格林尼治标准时间下午3点。

此演示文稿概述了利兹大学的Bourne小组在过程开发应用程序中进行的工作:

  1. 流动化学和在线HPLC在反应的自我优化中的使用
  2. 使用在线质谱通过实验设计方法优化连续流动反应
  3. 化学系统中用于多变量优化的新算法的开发