发表于

黑米中花青素-3-葡萄糖苷的提取、鉴定、纯化及定量

控制系统
闪光灯： puriFlash® 5.250，XS-Vap®
质谱： exexpression® 紧凑型质谱仪（CMS）
HPLC： AVANT™

介绍
大米是世界上最重要的食物之一，尤其是在亚洲国家。 在色素米品种中，黑米因其高营养价值和有益健康特性而受到越来越多的关注。 黑米是富含花青素的色素米，含有花青素-3-葡萄糖苷（Cyn-3-Glu）、花青素-3-芸香苷（Cyn-3-Rut）、芍药苷-3-葡萄糖苷（Pn-3-Glu）等花青素。 Cyanidin-3-glucoside 是黑米中的主要花青素。

本应用简报介绍了如何从黑米中提取花青素-3-葡萄糖苷并使用 prepLC/Flash 系统进行纯化。 Cyn-3-Glu 的含量和纯度使用经过认证的参考标准进行测量。

付款方式
花青素-3-葡萄糖苷提取
黑米从当地杂货店购买，用香料研磨机研磨成细粉，并用以下方法提取：
1. 将 30 克磨碎的黑米与 200 mL 用 1.0 N HCl 酸化的甲醇（85:15，v/v）混合，并超声处理 15 分钟。
2. 将混合物在 7500℃、4 rpm 下离心 5 分钟。 将上清液倒入干净的烧瓶中。 再次用 200 N HCl（1.0:85，v/v）酸化的 15 ml 甲醇提取沉淀，并超声处理 15 分钟。
3.合并两次提取的上清液并使用旋转蒸发器减少至25ml。
4.一小部分浓缩提取物用水稀释10倍用于HPLC/UV/MS分析，其余部分直接加载到PrepLC/Flash系统上进行纯化。

分析 HPLC/UV/MS 设置
表1： 黑米提取物的分析 HPLC/UV/MS 方法。

黑米提取物的分析型 HPLC/MS 分析
将黑米浓缩提取物用蒸馏水稀释 10 倍，用于 HPLC/CMS 分析。

质量范围为 200 至 800 Da，HPLC/MS 色谱图如图 1a 所示。 图 12.10b 显示了 1 分钟处峰的平均 MS 谱图，其中单个离子在 m / z 449.2 在正 ESI 模式下检测到。 具有源内 CID 的 MS 谱图如图 1c 所示，显示了在 m / z 287.0

图1： A）。 黑米提取物的 HPLC/MS 色谱图，B)。 12.10 分钟处峰的平均质谱，C)。 12.10V 源内 CID 下 30 分钟处峰值的平均质谱。

MS 光谱数据库搜索
通过Advion Data Express中的MS谱数据库搜索，确认12.1分钟洗脱的化合物为Cyanidin-3-glucoside (Cyn-3-Glu)。

图2： 图 1c 中提取的平均 MS 谱图的库搜索结果。

Peak Express 软件有助于检测其他花青素
Data Express 中实现的 Peak Express™ 软件可以动态确定所有被检测离子的强度变化率和标准偏差，并且仅显示超过预设阈值设置的离子。

Peak Express™ 有助于检测 ΔIC 色谱图中 14.41 分钟处的另一个峰（图 3b），该峰在 TIC 色谱图中几乎没有显示（图 3a）。 具有源内 CID 的 ΔS Delta 谱显示在 m/z 463.3 和 301.1 处检测到两个离子。

质谱数据库检索确定为Peonidin-3-O-glucoside（检索结果见图4）。

图3： A）。 黑米提取物的 HPLC/MS 色谱图，B)。 黑米提取物C)的ΔIC色谱图。 14.41 分钟峰值的 ΔS Delta 频谱，源内 CID 电压为 30V

图4： 图3c中ΔS Delta谱的库搜索结果

黑米提取物的 HPLC/UV 分析
还通过 HPLC/UV 分析黑米提取物。 在 3 分钟时，在 12.01 nm 和 278 nm 处发现了 Cyn-518-Glu 的两个特征紫外吸收峰（图 5b）。

520 nm 用于触发 PrepLC/Flash 系统纯化中的级分收集。

图5： A）。 黑米提取物的 HPLC/UV 色谱图，B)。 12.07 分钟处峰值的紫外吸光度曲线

cyn-3-glu 纯化的 PrepLC 方法
表2： 用于 Cyn-3-Glu 纯化的 PrepLC 方法

纯化
黑米提取物纯化在 Advion Interchim Scientific puriFlash 上进行® 5.250 PrepLC/Flash 系统。

溶剂和分离方法的详细信息列于方法表中。 黑米提取物（3 ml 样品）的典型 PrepLC/UV 色谱图如图 6 所示。

收集的每个级分均通过 HPLC-UV/MS 进行额外分析，以确认鉴定并提供额外的纯度分析。

图6： 黑米提取物在 puriFlash 上的 prepLC 色谱图 (520 nm)® 5.250 PrepLC/Flash 系统

馏分 2、5 和 8 的 HPLC/UV 分析
所有级分均通过 HPLC/UV/MS 进行分析。 级分 1 的 HPLC/MS 分析显示存在 m/z 611 的杂质，Cyn-3-Glu 的 UV 响应较低。 馏分2-8的纯度超过97.6%。 馏分 2、5 和 8 的 HPLC/UV 色谱图用作图 7 中所示的示例，其中 97.6 的纯度为 2%，馏分 100 和 5 的纯度为 8%。

除第一个级分外，将所有级分合并以干燥。 级分干燥在 Advion Interchim Scientific puriFlash 上进行® 室温下的 XS-Vap 系统。 从3g黑米中纯化得到的Cyn-30-Glu的重量为25.8mg。

图7： 馏分 a) 馏分 2、b) 馏分 5、c) 馏分 8 的 HPLC/UV 色谱图。

通过 HPLC/UV 定量 C3G
为了确认干燥样品的最终纯度，使用经过认证的 Cyn-3-Glu 参考标准品对干燥的 Cyn-3-Glu 进行定量分析，以检查其纯度。 Cyn-3-Glu 参考品的 HPLC 校准曲线如图 8 所示。

测得Cyn-3-Glu的量为25.5mg，纯度为99.0%。

图8： Cyn-3-Glu 参考标准品的 HPLC/UV 校准曲线

结论
利用已开发的 HPLC/UV/MS 和 PrepLC 方法，可以对黑米提取物中的 Cyn-3-Glu 进行分离、纯化和定量。

从25.5g黑米中纯化得到3mg的Cyn-30-Glu，纯度为99.0%。
Interchim PrepLC/Flash 和 Advion HPLC-UV/CMS 的组合是一种简单且经济高效的解决方案，用于从大米样品或含有 Cyn-3-Glu 的样品中提取和纯化 Cyn-3-Glu。

遵循此一般工作流程：

HPLC/CMS 为天然产物纯化中目标化合物的鉴定和纯度分析提供了一种简单的方法。

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使用 puriFlash® 5.250 PrepLC 和 ex 从复杂混合物中纯化生物活性肽expression® CMS 探测器

控制系统
质谱： exexpression® CMS
闪光灯： puriFlash® 5.250 制备液相色谱
HPLC： AVANT®

作者
郝长通
Advion Interchim 科学

介绍
近年来，生物制药公司越来越多地采用基于肽/蛋白质的药物，因为与传统的小分子药物相比，它们具有增强的特异性和选择性。 然而，药物发现过程中肽/蛋白质的纯化对于确保最终产品的安全性和有效性至关重要。 生物活性目标化合物达到尽可能高的纯度对于最大限度地降低毒性风险和遵守监管标准至关重要。[1,2]

乳清分离蛋白是奶酪生产的副产品，含有多种糖巨肽和两种重要的生物活性肽，即分子量 (MW) 为 6757 Da 的酪蛋白巨肽 A (CMPa) 和分子量 (MW) 为 6787 Da 的酪蛋白巨肽 B (CMPb) 。 提取和纯化单个成分，例如酪蛋白
巨肽对于研究其生物活性至关重要。[3]

在本应用说明中，我们以乳清分离蛋白和两种酪蛋白巨肽为例，演示使用 puriFlash 组成的系统分离和纯化生物活性成分® 5.250 prepLC 在线耦合到 exexpression® CMS 检测器。 与 UV 或 ELSD 等传统检测器相比，这种组合提供了更高的选择性和灵敏度，传统检测器可能无法有效地响应生物活性目标肽和蛋白质。


Advion Interchim 科学
puriFlash® 5.250


Advion Interchim 科学
exexpression® CMS

付款方式
乳清分离蛋白的制备
• 本申请中使用的酪蛋白巨肽分离程序基于 Tadao Saito 的工作[4] 有一些修改。
• 将从当地杂货店购买的 50 g 乳清分离蛋白样品与 500 mL 70% 水和 30% 甲醇 (v/v) 的溶剂混合物混合。 将混合物在70℃下超声处理90分钟，然后减压过滤。
·使用旋转蒸发器在300℃减压下除去甲醇，将所得滤液浓缩至体积40mL。 然后将其在 4°C 下保存一小时。 随后，将等体积的冷乙醇添加到溶液中，并将混合物涡旋5分钟，然后在4°C下再保存4小时。
·使用0.5μm过滤器在减压下过滤混合物。 然后使用旋转蒸发器在减压下将最终滤液浓缩至体积50mL。
• 将 100 µL 等份浓缩提取物与 900 µL 去离子 (DI) 混合
用于分析型 HPLC/MS 分析的水。
• 剩余的滤液用于使用 puriFlash 进行肽纯化® 5.250 PrepLC 系统与 ex 耦合expression® CMS 检测器。

表1： 分析 HPLC/MS 方法设置

分析 HPLC/MS 方法设置
首先使用 AVANT 分析乳清分离蛋白的液体提取物® HPLC/CMS 系统和针对所用 4.6 mm 色谱柱开发的色谱分离方法（表 1）。

图 1a 显示了液体提取物的 HPLC/MS 色谱图。 6.44 分钟处峰的平均 MS 谱表明该化合物是多电荷肽，在 m / z 755.2、849.4、970.6、1132.1 和 1358.6（图 1b）形成电荷分布。

通过软件电荷反卷积，确定肽的不带电荷质量为 6787.4 Da，表明酪蛋白巨肽 B（CMPb，理论质量为 6787 Da）（图 1c）。


Advion Interchim 科学
AVANT® （U）HPLC


图1： (a) 乳清蛋白分离物液体提取物的 HPLC/MS 色谱图，(b) 室温 6.44 分钟处峰的平均 MS 谱图，(c) 室温 6.44 分钟处肽洗脱峰的解卷积、不带电质量。


图2： (a) 乳清蛋白分离物液体提取物的 HPLC/MS 色谱图，(b) 室温 11.02 分钟时峰的平均 MS 谱图，(c) 室温 11.02 分钟时洗脱的肽的解卷积、不带电质量。

从 11.02 分钟洗脱峰获得的平均 MS 谱表明，该化合物也是一种多电荷肽，质量为 m/z 751.5、845.4、966.1、1126.8 和 1352.1（图 2b），形成其电荷分布。

同样，电荷解卷积确定该肽的不带电质量为 6755.3 Da，表明酪蛋白巨肽 A 变体 CMPa 的理论质量为 6755 Da（图 2c）。


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puriFlash® 5.250，MS 分离器和前expression® CMS

PrepLC/MS 色谱法
下一步，将分析分离方法转换为更大的制备规模，从 4.6 mm 柱内径改为 30 mm 柱内径，并进一步优化 puriFlash 上两种 CMP（酪蛋白糖巨肽）的纯化® 5.250 PrepLC/Flash 系统与 ex 在线耦合expression® CMS 检测器。

乳清分离蛋白的 PrepLC-UV/MS 色谱图如图 3 所示，参数如表 2 所示。

馏分收集是根据 MS 信号触发的，之所以选择 MS 信号是因为它具有更高的选择性和灵敏度。 970-971 Da 的 XIC 用于检测 CMPb，965-966 Da 的 XIC 用于检测 CMPa。

使用旋转蒸发器在负压下除去级分11-17和级分18-22的组合中的有机溶剂，并且剩余的水性溶液
使用 LABCONCO Freezone 2.5L（-50℃）冻干机干燥溶液，得到每份 10 mg 的干燥收集物，然后将其溶解在 10 ml 去离子水中用于后续 HPLC/UV/MS 分析。 纯度分析结果如图4和图6所示。

表2： PrepLC/MS 方法设置


图3： 两种乳清分离蛋白的 PrepLC-UV/MS 色谱图

成果

CMPb 的纯度分析
合并级分 11 至 17 中 CMPb 的纯度分析如图 4 所示。MS 分析显示检测到四种主要离子，m/z 分别为 970.8、1132.3、1358.6 和 1968.2（图 4b）。

根据图 4b 的平均质谱，确定 5.94 分钟处峰的不带电质量为 6788.4（CMPb，图 4c）。 然而，MS 分析还可以检测 6758.3、6773.5、6804.8 和 6868.4 Da 处的四种微量成分。

获得的 CMPb 的 UV 纯度为 86.7%（图 4d），但是根据额外的 MS 数据，化合物纯度实际上低于该值（估计为 80%）。

根据分析运行的 UV 分析，测得合并级分 18 至 22 中的 CMPa 为 94.7%（图 5a）。

解卷积不带电质量分析显示 CMPa 的预期主要质量为 6756.2（图 5b），以及 6774.6 处的一个次要成分（CMPa 的氧化形式）。

该示例再次显示了 MS 检测肽和蛋白质等生物活性化合物的价值，以及与 UV 相比 MS 检测具有更好的特异性。


图4： (a) 11-17 合并馏分的 HPLC-MS 色谱图，(b) 在 RT 5.94 分钟时洗脱的峰的平均 MS 谱图，(c) (b) 中的不带电质量，(d) 合并馏分的 HPLCUV 色谱图11-17。


图5： (a) 18-22 的合并级分的 HPLC-UV 色谱图。 (b) CMPa 的解卷积不带电质量。

最终的总体纯度估计约为。 90%，对于药物发现中的生物活性分子来说具有极高的价值。

通过选择性馏分可以进一步提高纯度——但代价是产量。 例如，CMPa 级分 20 的 HPLC-UV/MS 分析（图 6a）显示 UV 纯度为 99.0%（图 6d），并且 MS 分析中没有氧化副产物。


图6： (a) 馏分 20 的 HPLC-MS 色谱图，(b) 室温 5.71 分钟时峰的平均 MS 谱图，(c) CMPa 的解卷积不带电质量 (d) 馏分 20 的 HPLCUV 色谱图。

结论
puriFlash® 5.250 PrepLC/Flash 系统，与 ex 在线耦合expression® CMS 检测器具有出色的性能，有助于以高置信度从复杂基质中选择性纯化生物活性大肽。 与 UV 或 ELSD 检测器相比，质谱仪具有卓越的选择性和灵敏度。

该方法的一个说明性应用显示了酪蛋白二醇大肽的分离，通过高产率的组合级分，获得了 80% (CMPb) 至 90% (CMPa) 的纯度范围。 通过选择性馏分，可以实现高达 99.0% 的更高纯度。

 

参考文献：

[1]格拉斯伦德，S.，等人。 （2008）。 蛋白质生产和纯化。 自然方法，5(2), 135-146。
[2]生物制药加工：制造工艺的开发、设计和实施。
[3]林T.，等人。 (2021) 牛奶中的生物活性物质：化学、技术和应用营养评论 v79(S2):48–69
[4]Saito T.，呃。 (1991)从甜奶酪乳清中分离酪蛋白糖肽的新方法。 J.乳制品科学。 74、2831-2837

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使用 Advion Interchim Scientific SOLATION 进行血液分析® ICP-MS

介绍

微量元素对于人类正常的生物功能至关重要，不同水平的微量元素预示着许多疾病和状况。 由于人类或工业活动产生的环境污染物沉积在土壤、空气、水和食品中，人体中也存在非必需微量元素。 使用 ICP-MS 可以轻松测量和监测血液、血清和尿液中的这些必需和非必需微量元素。

在本应用说明中，我们提出了一种使用 SOLATION 对小体积血液样本中关键有毒元素和必需元素进行常规分析的快速方法® 使用简单的“稀释和喷射”样品制备的电感耦合等离子体质谱仪 (ICP-MS)。 ICP-MS 的高灵敏度和宽动态范围对于痕量重金属的测定特别重要，同时还能测量较高浓度的营养相关元素。 血液是一种复杂的基质，富含蛋白质和盐，有利于形成影响许多分析物的碳基和氯基干扰物。 Advion Interchim Scientific SOLATION 上的碰撞池® ICP-MS 对于克服这些干扰是必要的。

慰藉® ICP-MS 具有八极碰撞池，用于解决多原子离子的干扰，特别是过渡金属元素的干扰。 对于稳健的常规微量元素分析来说，至关重要的是八极池不会受到污染，否则可能导致漂移和不必要的停机。 通过界面的离子被引导通过 90° 转弯，并使用四极偏转器 (QD) 聚焦到八极杆的入口处。 光和中性粒子继续穿过量子点并远离细胞。

SOLATION 中的碰撞室® ICP-MS 可以在“He 气”模式下运行，在该模式下池中充满 He 作为碰撞气体，或者在“无气体”模式下运行，在该模式下池为空。 “He Gas”模式用于受多原子干扰的同位素，而“No Gas”模式用于其余同位素。 SOLATION 上“He Gas”和“No Gas”模式之间的快速切换® （< 5 秒）确保分析运行可以保持较短，从而提高生产率。

实验与结果

试剂与材料

硝酸（Aristar Plus，微量金属级）
Triton X-100（特别纯化，罗氏化学）
水，类型 1（18.2 MΩ，Elga 使用点系统）
甲醇（用于 LC-MS 的超级，Supelco）
Mg、Ca、Mn、Cu、As、Se、Cd、Pb、Ge、Rh、Au 和 Ir 标准溶液（1000 μg/ml，Claritas ppt 级） 
微量元素全血 L-1 (SRM1) (Seronorm)
微量元素全血 L-2 (SRM2) (Seronorm)
微量元素全血 L-3 (SRM3) (Seronorm)
空白全血 (WB(F)) (UTAK)
酸稀释剂：（0.5% 硝酸、0.05% Triton X-100、2% 甲醇、0.25 μg/mL (ppm) Au，内标：10 μg/L (ppb) Ge、Rh 和 Ir）

表1：校准和标准浓度

标准

该方法用于测定全血样品中的 Mg、Ca、Mn、Cu、As、Se、Cd 和 Pb。 这些元素被选择代表血液中一些常用的金属，包括必需元素和有毒元素。 使用酸性稀释剂和四种浓度水平的元素制备标准品，以覆盖血液中常见的范围。 表 1 概述了每个水平的标准浓度以及该水平的元素。 表 2 中列出了每种分析物使用的分析模式和内标。ICH 指南要求至少使用 XNUMX 个浓度才能建立线性； 我们使用六个校准空白来满足这一要求。

表2: 分析模式和内标

样品和准备

样品在 15mL 无金属离心管中制备。 将酸稀释剂 (14.7mL) 添加到每个管中，然后添加 0.3mL 血样进行 1:50 稀释。 将管盖上并颠倒 3-5 次以充分混合。

使用 SOLATION 分析样品® 电感耦合等离子体质谱。 解决方案® 用于该分析的仪器配置是带有 Micromist 同心雾化器和一体式炬管的旋风雾化室。 在整个研究过程中使用了镍采样器和截取锥。 表 3 总结了仪器的运行条件。

表3: ICP-MS 操作参数

结果与讨论

我们遵循 ICH“分析程序验证”指南进行方法验证，该指南定义了准确度、精密度（重复性）、检测限和方法检测限（DL 和 MDL）以及定量限（LOQ）的具体要求。 

该方法的准确性是使用 Seronorm 参考材料确定的，该参考材料具有该方法中所有元素的经过认证的浓度值。 对这些材料进行三次测量，并将分析结果与 Seronorm 提供的认证值和 95% 置信限进行比较。 

这些值绘制在图 1 中，其中最小和最大认证值以方框表示。 我们的分析值绘制在图 1 中，在每种情况下，我们的值都位于限值内，表明精度很高，很容易满足 ICH 规范。

准确性的第二个衡量标准是尖峰恢复。 将来自 UTAK 的“空白血”(WB(F)) 样品添加到 150mL 试管中除 Ca 和 Mg 之外的所有元素的 15μL 标准储备溶液中。 回收率计算如下： 

加标回收率如表 4 所示。所有回收率均在 90 – 110% 范围内，表明加标分析物具有出色的回收率。

表4：尖峰恢复

方法精度通过六个 Seronorm 2 级 (SRM2) 样品的重复性来衡量。 分别制备、稀释并分析了 2 个 Seronorm 2 级 (SRM3) 样品。 结果显示重复值的 RSD 小于 2%。 六个重复的 %RSD 如图 XNUMX 所示。


图1：经过认证的 Seronorm 材料分析的准确性


图2: Seronorm 材料分析的精度

使用八种酸性稀释剂空白信号的标准偏差 (σ) 确定方法检测限 (MDL) 和定量限 (LOQ)。 使用与样品相同的技术和设备制备酸性稀释剂空白，并在每次运行结束时加入校准标准。 MDL 和 LOQ 计算如下： 

其中 S 是校准斜率，并且：

由于校准斜率是相对于内标的分析物，因此使用校准标准来确定计数/秒/ppb。 这些值经过计算后乘以 50 以考虑稀释系数，并以 µg/L (ppb) 表示。 在表中，MDL 和 LOQ 是相对于 Seronorm 2 (SRM2) 代表的生理正常值绘制的。 相比之下，大多数分析物的 MDL 和 LOQ 都很小，特别是对于主要元素钙和镁。 然而，即使对于硒等更具挑战性的分析物，MDL 也比 Seronorm 2 (SRM2) 低一个数量级，尽管 Seronorm 2 (SRM2) 是 XNUMX 级 (SRMXNUMX)，但其硒含量是这三种 SRM 中最低的。 


图3：LOQ 和 MDL 与生理正常值相比
*以 Seronorm L2 为代表，制定为代表典型或平均人类值。

结论

在本应用说明中，我们报告了使用 Advion Interchim Scientific SOLATION 分析血液中的微量元素® ICP-MS。 血液是一种复杂且具有挑战性的基质。 然而，这些数据支持使用简单的“稀释和射击”样品制备方法，该方法可以为血液中的高水平和痕量元素提供准确且精确的浓度。 加标样品和 CRM 均观察到出色的回收率。 四极偏转器和碰撞池的组合可最大限度地减少漂移并确保长期的准确性和精度。 所报告的方法受益于 SOLATION 的快速碰撞池气体切换功能® 分析血液中的多种元素，以获得快速、准确且可重复的结果。

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使用 Advion Interchim Scientific AVANT™ HPLC 和 ex 分析碘海醇expression® CMS系统

介绍

碘海醇是一种广泛使用的非离子成像剂，可提高 X 射线分析的对比度。 其低渗透压允许通过肾脏快速清除，防止重吸收和进一步代谢[1]. 与其他显像剂相比，这使得碘海醇成为一种具有更好安全性的化合物[2]. 

在许多临床成像应用中，成像剂/造影剂被施用于患者以提高扫描的对比度和空间分辨率。 由于显像剂的毒副作用，其已知浓度的制剂及其纯度分析对其安全使用和准确诊断非常重要。 

在本应用简报中，介绍了一种用于碘海醇分析的简单而准确的 HPLC-CMS 方法。

付款方式

方法设置

应用中使用的所有溶剂均为 HPLC 级。

两种碘海醇标准品购自 Sigma Aldrich。

一种是纯度为 99.99% 的有证标准物质，第二种标称纯度≥ 95%。

所有实验均在 Advion Interchim Scientific ex 上进行expression® 紧凑型质谱仪与 AVANT™ UHPLC 系统联用，其参数如表 1 所示。

表1: HPLC/MS 方法

碘海醇的 HPLC/UV/MS 分析

在室温下，碘海醇会异构化，在其 HPLC/UV/MS 分析中检测到两个峰。 

这两个峰（图 1A）来自苯胺 N-乙酰基的受阻旋转，这是由于碘海醇的中心苯环上附着的庞大碘原子所致。 这两种化合物本质上是“旋转异构体”，在室温下在水溶液中缓慢交换。

两个峰均通过 MS 分析确认，在 821.9 处显示相同的 m/z（图 1B 和 1C），并且在它们的源内 CID 质谱中没有可见差异（图 2A 和 2B）。 

由于这两种旋转异构体都有助于化合物在 X 射线分析中的毒性和成像增强能力，因此两个峰的总和将用于本应用简报中任何进一步的碘海醇分析。 


图1：(A) 碘海醇的 HPLC 色谱图 (254 nm)，(B) 质子化碘海醇的提取离子色谱图，m/z 821.8，(C) 室温 4.06 分钟处峰的平均 MS 谱图。


图2：(A) RT 3.61 分钟处峰值的平均源内 CID 质谱，(B) RT 4.06 分钟处峰值的平均源内 CID 质谱。

通过 HPLC/UV 分析进行纯度测定

通过将碘海醇样品的 HPLC 响应与相似浓度的碘海醇认证标准品的响应进行比较，样品与认证标准品的峰面积比可以提供快速的浓度和纯度分析。 

碘海醇浓度比的计算公式如下：

碘海醇样品和认证参比样品的 HPLC 色谱图如图 3A 和 3B 所示。

碘海醇样品的两个峰面积之和的平均值为 714（图 3A），碘海醇参考标准品为 740（图 3B）。 经浓度比计算，计算出样品中碘海醇的浓度为0.0964 mg/ml，纯度为96.4%，符合产品标称纯度≥95%。


图3: (A) 碘海醇样品 (254 mg/ml) 的 HPLC 色谱图 (0.1 nm) (B) 碘海醇参考标准品 (254 mg/ml) 的 HPLC 色谱图 (0.1 nm)。

通过 HPLC/UV 分析进行定量

为了更准确地检查碘海醇样品的纯度，使用 25 至 500 μg/mL 的五个不同稀释水平和每个浓度三次重复进样创建了碘海醇认证标准物质的校准曲线。 所得线性校准函数的 R 平方值为 0.9999（图 4），显示出出色的线性度。 

通过碘海醇校准曲线法，确定碘海醇样品的纯度为 97.5%。 

该值也恰好高于样品的最低 95% 的规定纯度，并且与碘海醇样品与碘海醇参考标准的直接 UV 响应比分析的测量值仅相差 1.1%。

如果有经过认证的参考标准物质，通过校准函数或直接 UV 响应比分析的纯度测定都可用于具有 UV 吸光度的有机化学品。

校准函数方法将提供更准确的测量。


图4: 碘海醇的 HPLC 色谱图 (254 nm) 校准曲线

结论

Advion Interchim Scientific AVANT™ (U)HPLC 系统可以为成像剂的纯度分析提供准确的色谱方法，如碘海醇所示。 将 UHPLC 与 Advion Interchim Scientific ex 联用expression® 紧凑型质谱仪不仅通过其质量和 源内碎裂模式，还可以快速测定杂质。 

参考文献：
[1] T. Almen，非离子造影剂的开发。，投资。 放射线。 (1985) 调查放射学。 1985, 20(1), S2-S9。
[2] RD Moore、EP Steinberg、NR Powe、RI White、JA Brinker、EK Fishman、SJ Zinreich、CR Smith，高渗透压造影剂引起的不良反应的频率和决定因素。放射学。 1989, 170, 727-32。

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姜黄粉中3种姜黄素的提取纯化

仪器仪表：
闪光灯： puriFlash® XS520
薄层色谱： Plate Express™ TLC读板器
质谱： exexpression® 紧凑型质谱仪
采样： 尽快® 直接分析探针

介绍

姜黄素是源自姜黄根 (Curcuma longa) 的天然多酚化合物。 据报道，它们具有抗氧化活性1. 姜黄素是姜黄中发现的主要类姜黄素。 它通常用作膳食补充剂和化妆品的成分、烹饪菜肴的调味剂和黄橙色食用色素。

在本应用说明中，介绍了一种使用 Advion Interchim Scientific puriFlash 快速色谱从姜黄粉中分离和纯化 3 种姜黄素的方法® XS520 Plus，带质谱仪的 TLC，带 Plate Express™ TLC 读板机和 exexpression® 演示了 CMS。 使用大气固体分析探针 (ASAP®).

姜黄素提取

称出姜黄粉 (57.3 g) 并转移到广口玻璃瓶中。 将乙醇（250 mL，200 proof）加入瓶中，并在盖上箔纸的同时搅拌混合物 18 小时。 感兴趣的化合物对光敏感。 然后过滤浆液并将滤液浓缩至干以形成琥珀色油状物(6.4g)。

图1： 类姜黄素的结构。

图2： 商店购买的姜黄粉（左）和粗提油（右）。

薄层色谱/质谱分析

Advion Interchim Scientific Plate Express™ 与 ex 配对expression® CMS 无需纯化或样品制备即可轻松识别 TLC 板上的斑点（图 3）。

初始 TLC 分析显示 4 个点（二氯甲烷：甲醇，97：3）。 三个较低的点是高度荧光的，正如对感兴趣的类姜黄素所预期的那样。 通过负离子模式的 APCI 电离分析 TLC 斑点。 底部 3 个点通过质谱法表征。

图3： Advion Interchim 科学公司expression® CMS 和 Plate Express™ TLC 读板机（左）和 TLC 板提取头特写（右）。

图4： 开发了在 365 nm 下可视化的 TLC 板。 生成的姜黄素（上图）、去甲氧基姜黄素（中图）和双去甲氧基姜黄素（下图）的质谱图。

闪蒸纯化

使用等度方法，因为 TLC 上显示的分离是最佳的。 在 25 g、15 μm 球形硅胶柱 (PF-15SIHC-F0025) 上纯化粗物质。 将 64 mg 的粗重干式装载到 500 mg 的硅胶上，并装载到 4 g 干式装载柱 (PF-DLE-F0004) 中。

图5： 从展开的 TLC 板得到的快速色谱图。

ASAP 馏分鉴定®/ CMS

前expression® CMS 与 ASAP® 直接分析探针无需 LC/MS 或样品补充即可轻松鉴定化合物。

使用 ASAP 分析纯馏分（1.1、1.3 和 1.5）® 具有 APCI 电离和正极性 CMS 的探针。 类姜黄素在 APCI 正极性和负极性中均能很好地电离，但是 (M+H)+ 离子显示出较少的碎片。 检测到的质量与理论 [M+H] 一致+ m/z 值。

图6： Advion Interchim Scientific 尽快® 直接分析探针直接插入到 ex 的 APCI 启用离子源中expression® CMS。

图7： 分数的质谱。

将纯化的馏分浓缩至干，分别得到固体 I (14.1 mg)、II (5.6 mg) 和 III (6.7 mg)，代表姜黄素 (I)、去甲氧基姜黄素 (II) 和双去甲氧基姜黄素 (III)，浓度为 53.4%，分离类姜黄素的 21.2% 和 25.3%。 这些结果与报道的文献值一致2.

通过 RP-HPLC 确认化合物纯度

图8： 纯化馏分混合物的 UV 扫描。

反相高效液相色谱 (RP-HPLC) 允许在快速色谱后单独确认化合物纯度。 混合所有三种化合物的等量混合物并在 Phenomenex Kinetex 上运行® 5 μm 联苯 100 Å 50 x 2.1 mm 色谱柱，使用含 55% 甲酸的等度乙腈:水 (v:v, 45:0.2)。 正如预期的那样，三种姜黄素的洗脱顺序发生了变化，现在洗脱 III、II 和 I（图 8）。 开发该方法后，分别注入单个收集的级分并分析纯度，并再次通过 MS 分析确认。

图9： 姜黄素组分 1.1 的 UV 扫描和质谱。

图10： 姜黄素组分 1.3 的 UV 扫描和质谱。

图11： 姜黄素组分 1.5 的 UV 扫描和质谱。

结论

通过在过程的各个阶段（TLC 板鉴定、馏分确认和二次纯度分析）结合 TLC 色谱、快速色谱和质谱支持，我们可以从姜黄粉中纯化类姜黄素，确认纯度水平 > 95%。

参考文献：
1Jayaprakasha 等人。 姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素的抗氧化活性。 食品化学，第 98 卷，第 4 期，2006 年，第 720-724 页。 ps://doi.org/10.1016/j.foodchem.2005.06.037。
2普拉文等。 用于分析姜黄中存在的类姜黄素的简便 NMR 方法，食品化学，第 341 卷，第 2 部分，2021 年，128646，https://doi.org/10.1016/j。 食品化学.2020.128646.

发表于

使用 Advion Interchim Scientific SOLATION 进行土壤分析® ICP-MS

介绍

人类或工业活动产生的环境污染物通常通过径流水或空气沉积进入土壤。 这些污染物可被植物吸收并沿食物链向上移动，从而可能对人类和动物健康产生重大影响。 因此，不仅监测土壤中对植物健康生长至关重要的必需养分水平很重要，而且监测污染物水平也很重要。

在本应用简报中，我们介绍了一种使用 SOLATION 对 21 种元素进行常规分析的方法® 电感耦合等离子体质谱仪 (ICP-MS)。 使用 EPA 3051a 消解一组未知土壤样品和 CRM，并根据方法 6020a 的要求进行分析。

实验

试剂和材料
• 硝酸（Aristar Plus，痕量金属级）
• 盐酸（Aristar Plus，微量金属级）
• 1 类水（18.2 MΩ，Elga 使用点系统或同等设备）
• NIST CRM2706“新泽西土壤、有机物和微量元素”
• Spex 'CL-ICV-1' 多元素溶液
• 铝标准溶液（1000 μg/ml，Claritas ppt 级）

控制系统
1. 配备 5000SVT20 转子的安东帕 Multiwave 50（20 位，50mL 容器，排气压力为 40 bar (580 psi)
2、OKF高速多功能研磨机
3. Advion Interchim 科学解决方案® ICP-MS

标准

按照与消解样品相同的酸比例配制校准标样（9mL HNO3+ 3mL HCl，或 3:1)。 一升 3% HNO3+ 1% HCl 用作标准品的稀释剂，用于样品的最终稀释，并用作校准空白。

使用 Spex 多元素溶液“CL-ICV-1”和单元素铝标样制作标准品。 铝被单独添加到混合物中，以解释土壤中这种元素的高含量。

样品和制备

将四个土壤样品在 60°C 下干燥过夜，然后使用 OKF 高速多功能研磨机进行精细研磨，制成均匀的混合物。 根据 EPA 方法 3051a“沉积物、污泥和土壤的微波辅助酸消化”，将每个样品 0.5 g 转移到微波容器中并与 9mL 硝酸和 3mL 盐酸混合。 然后盖上容器并使用表 1 中列出的方法运行。消解后过滤样品，用去离子水定容至 50mL 容量瓶中。 然后用准备好的稀释剂将 1.0mL 等分试样稀释至 50mL 的最终体积，根据初始样品重量，标称最终稀释度为 5,000 倍。

表1: 微波消解程序。

出于 QC 目的，将四种未知土壤样品制备为样品、重复样品和加标样品。 它们被独立消化，其中前两个用于比较样品制备的可重复性，而第三个在消化前被加标以建立消化程序的分析物回收率。

为验证结果的准确性，我们纳入了标准参考材料 NIST 2706“新泽西土壤、有机物和微量元素”，其中包括本研究中报告的所有分析物的认证值。

使用 SOLATION 分析样品® 电感耦合等离子体质谱。 解决方案® 用于此分析的仪器配置是带有 Micromist 的旋风雾化室® 同心雾化器和一体式炬管。 在整个研究过程中使用了 Ni 取样器和截取锥。 等离子操作参数为：

表2：等离子体操作参数。

ICP-MS 方法

SOLATION 的组成部分® ICP-MS 是一种八极碰撞池，用于解决多原子离子的干扰，尤其是过渡金属元素。 八极杆池不会受到污染，这可能会导致漂移和不必要的停机，这对于稳健和常规的痕量元素分析至关重要。 因此，SOLATION 的离子路径® ICP-MS 的设计使碰撞室远离等离子体的直线。 通过界面的离子被引导通过 90 ° 转弯，并使用四极偏转器 (QD) 聚焦到八极杆的入口。 光和中性粒子继续穿过 QD 并远离细胞。

SOLATION 中的碰撞室® ICP-MS 可以在“He 气”模式下运行，在该模式下池中充满 He 作为碰撞气体，或者在“无气体”模式下运行，在该模式下池为空。 “He Gas”模式用于受多原子干扰的同位素，而“No Gas”模式用于其余同位素。 SOLATION 上“He Gas”和“No Gas”模式之间的快速切换® （< 5 秒）确保分析运行可以保持较短，从而提高生产率。

本应用中“He Gas”模式使用的氦气流量为 6 ml/min。 表 3 列出了用于此分析的元素及其同位素，以及每种元素使用的模式。

表3：本研究中包含的元素列表及其同位素和用于分析的气体模式。

结果与讨论

图 1 中总结的结果表明，CRM2706 的测量数据与报告的这些元素的提取水平非常一致。 观察到 K 和 Al 的回收率略高，这可能是由于该消化方法的提取效率存在差异。

图1：认证参考物质回收率数据。

如表 4 所示，所有元素的平均加标回收率在 75% 到 125% 之间，Al 除外； 这可能是由于与样品中的铝水平相比，尖峰尺寸较小。 同一张表中包含这些元素的重复消解/分析的结果。 平均而言，重复项相距不到 20%，大多数元素显示出 <5% 的出色重复性。

表4：各种样品的平均加标回收率和重复重复性。

总结

在本应用简报中，我们报告了使用 Advion Interchim Scientific SOLATION 分析土壤中的微量元素® 电感耦合等离子体质谱。 加标样品和 CRM 均获得了出色的回收率。 四极偏转器和碰撞池的组合最大限度地减少了漂移，并确保了长期的准确度和精密度。 报告的方法受益于 SOLATION 的快速碰撞池气体切换功能® 分析土壤中的各种元素以获得快速、准确和可重现的结果。

发表于

天然产物的质谱定向馏分收集：以姜黄和绿茶提取物为例

闪光灯：puriFlash® 5.250
质谱：前expression® CMS
采样：尽快® 探测器

介绍

传统上，快速色谱法使用紫外吸收作为纯化过程中检测化合物的主要方法。 虽然 UV 吸收广泛适用于许多类别的化合物，但它对混合物中的单个化合物的特异性有限，并且遗漏了不携带发色团的化合物类别。

质量定向馏分收集使用户能够基于质谱检测 (MS) 收集馏分，质谱检测基于单个化合物特有的离子，并提供特定的分子信息。 这样可以简化整个纯化过程，并提高对每种分离化合物的鉴定的可信度。

在这里，我们描述了在快速色谱和制备型 LC 期间通过质量定向馏分收集从绿茶和姜黄粉中分离天然产物的方法。 出于演示目的，分离出的化合物随后通过大气固体分析探针 (ASAP®) MS 或 HPLC-MS。

姜黄素简介

姜黄素是在姜黄根 (Curcuma longa) 中发现的主要类姜黄素。 它通常用作膳食补充剂和化妆品的成分、烹饪菜肴的调味剂和黄橙色食用色素。 据报道，类姜黄素具有抗氧化和抗炎活性。

用乙醇提取商店购买的姜黄粉 (57.3 g)，然后通过滤纸过滤并浓缩。 这产生了 6.4 g 的粗提油，其中含有三种感兴趣的类姜黄素（也比较了图 4 中的 TLC 分析）。


图1：感兴趣的类姜黄素的结构。


图2：商店购买的姜黄粉。


图3：从姜黄粉中提取的粗油。


图4: 在 365 nm 处对姜黄提取物 (97:3 DCM:MeOH) 进行的 TLC 分析以及转移到 puriFlash 的方法的色谱图® 5.250 采用紫外检测。

方法开发

姜黄提取物首先在 TLC 板上进行分析，然后将方法转移到 puriFlash® 5.250 系统使用两个波长的 UV 检测。 在 254 nm 处检测到四种化合物，在 427 nm 处检测到三种假定的姜黄素类化合物，但是，在 UV 检测中对各个化合物没有特异性。

使用等度方法（97:3 二氯甲烷:甲醇）作为 TLC 上显示的最佳分离。 在 12g、15μm 球形硅胶柱 (PF-15SIHC-F0012) 上纯化粗物质。 将 32 mg 的粗重干式加载到 250 mg 的硅胶上，并加载到 4 g 干式加载柱 (PF-DLE-F0004) 中。 使用 XIC 通道收集每种感兴趣化合物的馏分。


图5：使用参数运行的快速色谱方法的屏幕截图。

质谱仪设置通过 InterSoft 控制®puriFlash 上的 X 软件® 系统。 质谱仪装有 APCI 源并以负电离采集模式运行。


图6：用于色谱运行的质谱仪参数的屏幕截图。

实验

质量导向馏分收集

提取离子色谱图 (XIC) 通过绘制所选质荷比值处观察到的信号的强度而创建。 这允许感兴趣化合物的低噪声信号。 此处 XIC 通道设置为检测三种感兴趣的姜黄素。


图7: 姜黄提取物 (97:3 DCM:MeOH) 的 TLC 分析和转移到 puriFlash 的方法的色谱图® 5.250 使用 MS XIC 检测。




图8：puriFlash 提供的每个峰的质谱图® 英特软件®X软件。

尽快® MS 分数确认

使用 ASAP 对纯馏分（1.1、1.2 以及合并的 1.3 和 1.4）进行额外分析® 负极性 MS。 检测到的质量与理论 [MH]-m/z 值一致。




图9：分离化合物的质谱图证实了它们的身份和纯度。

介绍，绿茶儿茶素

基于干重，干绿茶通常含有 10-30% 的多酚，儿茶素是主要的茶多酚，包括：(−)-表没食子儿茶素 (EGC)、(−)-表没食子儿茶素-3-没食子酸酯 (EGCG)、(−) -表儿茶素- 3-没食子酸酯 (ECG) 和 (−)-没食子儿茶素没食子酸酯 (GCG)。 EGCG 是含量最丰富且具有生物活性的儿茶素，从生茶提取物中分离纯化儿茶素可大大提高其市场可用性和价值。

将干燥的绿茶叶提取到热水中，然后用乙酸乙酯分配，通过滤纸过滤，蒸发得到粗提取物。 然后将干提取物溶解在 7.5 mL 水中，并在进一步处理前用 0.2 μm 过滤器过滤。


图10：浸泡绿茶叶。


图11: 绿茶中的主要儿茶素。

方法开发
通过 HPLC-UV/MS 分析，可在茶提取物中检测到 EGC、EGCG、GCG、EC 和 ECG（图 12）。

溶剂 A：水
溶剂 B：甲醇
紫外线：275 纳米
MS：150-900 全扫描
立柱：US15C18HP-250/046


图12：绿茶提取物的 HPLC-UV 色谱图、MS 数据和 EGCG 标准用于化合物确认（数据未显示）。

质谱仪设置通过 InterSoft 控制®puriFlash 上的 X 软件® 系统。 质谱仪配有 ESI 源并以负电离采集模式运行。


图13：用于色谱运行的质谱仪参数的屏幕截图。

质量导向馏分收集
此处 XIC 通道设置为检测感兴趣的 4 种儿茶素。 EGCG 和 CGC 是异构体，因此质量相同。


图14: 转移到 puriFlash 的方法的色谱图® 5.250 使用 MS XIC 检测。


图15：InterSoft 提供的每个峰的质谱图®X软件。

结论

• 对于天然产物的分离，最大的挑战之一是在复杂的提取物混合物中鉴定感兴趣的化合物。
• 串联使用质谱和色谱法，我们可以分离和鉴定复杂混合物中的化合物，具有高纯度和准确度，无需进一步鉴定收集的馏分。
• 收集的馏分可以直接通过 InterSoft 提供的 MS 数据进行表征®puriFlash 上的 X 软件® 系统。
• puriFlash® 5.250 及以上expression® CMS 在纯化和鉴定天然产物（例如绿茶中的儿茶素和姜黄中的姜黄素）方面发挥着强大的作用。

发表于

通过反相制备 LC-MS 对五种非处方药和处方药化合物进行高通量纯化

控制系统:

puriFlash® 5.250
exexpression® CMS
上层® StrategyTM 立柱 US5C18HQ-150/300

作者:

Advion Interchim Scientific，蒙吕松，法国总部

 

介绍

纯化是药物开发的关键步骤。 从研究到放大再到工艺，纯化和确认是将药物推向市场的重要步骤。 必须有一种高通量解决方案，以提供足够数量和可重现质量的纯化化合物。 使用制备色谱系统可以轻松实现活性药物成分 (API) 与其杂质的分离。

本应用简报介绍了非处方 (OTC) 药物中的五种活性成分的纯化，包括咖啡因、格拉芬宁、酮洛芬、黄酮和非诺贝特（图 1），通过使用紧凑型质谱仪确认的制备纯化工作流程。

图1： 五种感兴趣的化合物包括咖啡因、格拉芬宁、酮洛芬、黄酮和非诺贝特。 下面重点介绍化学结构和制药用例。

咖啡因： 咖啡因是一种具有兴奋作用的天然化学物质，可以以片剂形式纯化，或天然存在于咖啡、茶、可可等中。

格拉芬宁： 一种非甾体抗炎药 (NSAID)，由于过敏反应的高风险，格拉芬宁于 1991 年从市场上撤下。

酮洛芬： 酮洛芬是一种基于处方的非甾体抗炎药 (NSAID)，用于治疗 炎症、肿胀、僵硬和关节疼痛。 由于心脏病发作、中风、刺激和其他问题的风险增加，该药于 1995 年停产。

黄酮： 一种通常存在于植物中的代谢物和杀线虫剂。

非诺贝特： 一种处方药，用于降低和治疗血液中的高胆固醇和甘油三酯（脂肪样物质）水平。

实验

探索性液相色谱分离

图2： 为了确认预先确定的化合物的存在，探索性 LC-UV 运行在纯化之前确认了药物化合物的存在。

制备液相色谱运行

根据 XNUMX 种目标化合物的阳性 ID 及其洗脱点，药物混合物即可在 puriFlash 上进行制备型 LC-UV 运行® 5.250 ELSD。 iELSD 包有助于纯化，从而能够检测无发色团的化合物（图 3）。

结果和验证

分离纯化结果

使用 Advion Interchim Scientific ex 确认分离化合物的身份expression® 紧凑型质谱仪，快速准确地识别感兴趣的化合物。

这些化合物的纯度可以使用分析级 HPLC 进行验证。

发表于

SOLATION®，一种用于检测大麻和大麻中重金属的新型 ICP-MS

介绍

大麻和大麻产品变得越来越多 可使用 。 药用和娱乐用途 对有毒重金属进行常规检测 重要得多.  Advion Interchim Scientific 介绍了 SOLATION® ICP-MS 用于 的分析 重金属在 大麻植物和大麻产品样品。 虽然没有针对大麻中重金属的联邦指导方针，但大麻使用和生产合法的州有 采用 暴露 范围 和质量控制标准 用于砷、镉、汞, 和铅 基于 USP<233>. 在这里，我们报告结果 我们的样本分析sis 使用这些指南。 

方法

大麻花是在当地购买并精细研磨用于分析。 使用微波消解系统 (CEM Mars 6，马修斯，北卡罗来纳州）。 方法验证 。 USP<233> 基于准确度、使用加标回收率、重复性 4.9分 六个独立消解重复的 %RSD 和耐用性，其中这 6 个重复由另一位分析人员、另一台仪器或另一天再次运行。 峰值水平基于定义的“行动水平” by 加利福尼亚州最大允许每日暴露 (PDE) 限值作为指导：铅 0.5 µg/g、砷和镉 0.2 µg/g 和汞 0.1 µg/g 用于定义 100% 加标水平。 样品的加标量也分别为作用水平的 50% 和 150%。 

初步数据

为了消化， 0.5 g (+/- 0.002g) 样品用 9mL 浓缩液处理。 HNO3 和 1mL 浓HCl 在微波容器中并允许 应对 对于15 分钟 在被封顶之前. 容器在微波炉中装载到转盘上 和“一键式”大麻方法，由 CEM 提供，是 用过的。 样品是 被带到200°C的 30分钟，在那里举行 10分钟，让其冷却。 结果是一种清澈、无颗粒的溶液。 慰藉® ICP-MS 用于 分析 样本 对于 As、Cd、 汞和铅 消化后 和稀释。 这 结果 显示 解决方案® ICP-MS 能够产生准确的值 由加标回收率测量 哪些是 好 中 70-150% 范围。  结果 来自 6 个独立的摘要 为 中 定义的限制 20% 相对标准差. 重复分析 6 个摘要 在另一天 显示 与初步结果吻合良好 和 为 字幕可视电话用于 25% RSD 规格. 由 USP<233 定义>。 总体结果 表明 SOLATION® ICP-MS 是一种有效的 用于分析大麻和大麻样品的仪器。

 

发表于

天然产物的大规模定向馏分收集：姜黄和绿茶提取物的例子

介绍

通过探索传统药物和发现药理学的新空间，天然产物一直是临床前药物发现的灵感来源。 天然产物的分离和表征仍然是药物发现的主要障碍。 分离通常在分析规模上进行，然后在尝试任何放大纯化之前对化合物进行充分表征。 通过高度特异性的 MS 数据纯化复杂天然产物混合物中的化合物的能力可以简化该过程的纯化和表征步骤。 在这里，快速色谱和制备色谱与 MS 检测相结合，以纯化绿茶和姜黄提取物中的天然产物。 

方法

绿茶中主要儿茶素和姜黄中主要姜黄素的分离是通过提取完成的。 提取绿茶叶，并使用 UPLC-MS 和分析标准分析粗品，以鉴定目标儿茶素，并开发合适的制备型 LC 方法进行分离。 提取姜黄粉，然后使用 Advion 的 Plate Express 通过 TLC-MS 分析™ 识别感兴趣的化合物并开发合适的快速色谱分离方法。 使用与 Advion 的 ex 相连的 Interchim 的 puriFlash 5.250 flash/prep 色谱系统，使用质量导向馏分收集对两种提取物进行纯化expression® 单四极质谱仪。 使用 XIC MS 通道检测目标化合物。 然后使用 HPLC-MS 测定分离化合物的纯度。

初步数据

我们能够成功地分离出姜黄中的 3 种主要姜黄素（姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素）和绿茶中的 5 种主要儿茶素 ((-)-表没食子儿茶素 (EGC)、(-)-表儿茶素 (EC)、(-) -表没食子儿茶素-3-没食子酸酯 (EGCG)、(-)-表儿茶素-3-没食子酸酯 (ECG) 和 (-)-没食子儿茶素没食子酸酯 (GCG)，纯度高（≥95%）。   

使用 TLC (97:3 DCM:MeOH) 开发了等度快速色谱法 (97:3 DCM:MeOH) 以纯化姜黄素。 TLC板通过APCI分析– MS 使用 Plate Express 直接从板上提取斑点，无需样品制备。 使用带有 APCI 的提取离子色谱 (XIC) 通道收集馏分– 多发性硬化症。 然后通过 ASAP 对馏分进行表征– 使用 HPLC-MS 确定每个级分的 MS 和纯度。 

使用 HPLC-MS 和参考标准品开发了一种用于绿茶中儿茶素的制备型 LC 方法，以鉴定每种目标化合物。 使用水甲醇梯度并使用为感兴趣的化合物设置的 XIC 通道收集馏分。 通过 HPLC-MS 对馏分进行表征并确定其纯度。 EGC、EGCG、GCG 和 ECG 级分经测定分别具有 100%、99.8%、98.8 和 100% 的纯度。