通过反相制备 LC-MS 对五种非处方药和处方药化合物进行高通量纯化

控制系统:

puriFlash® 5.250
exexpression® CMS
上层® StrategyTM 立柱 US5C18HQ-150/300

作者:

Advion Interchim Scientific,蒙吕松,法国总部

 

介绍

纯化是药物开发的关键步骤。 从研究到放大再到工艺,纯化和确认是将药物推向市场的重要步骤。 必须有一种高通量解决方案,以提供足够数量和可重现质量的纯化化合物。 使用制备色谱系统可以轻松实现活性药物成分 (API) 与其杂质的分离。

本应用简报介绍了非处方 (OTC) 药物中的五种活性成分的纯化,包括咖啡因、格拉芬宁、酮洛芬、黄酮和非诺贝特(图 1),通过使用紧凑型质谱仪确认的制备纯化工作流程。

图1: 五种感兴趣的化合物包括咖啡因、格拉芬宁、酮洛芬、黄酮和非诺贝特。 下面重点介绍化学结构和制药用例。

咖啡因: 咖啡因是一种具有兴奋作用的天然化学物质,可以以片剂形式纯化,或天然存在于咖啡、茶、可可等中。

格拉芬宁: 一种非甾体抗炎药 (NSAID),由于过敏反应的高风险,格拉芬宁于 1991 年从市场上撤下。

酮洛芬: 酮洛芬是一种基于处方的非甾体抗炎药 (NSAID),用于治疗 炎症、肿胀、僵硬和关节疼痛。 由于心脏病发作、中风、刺激和其他问题的风险增加,该药于 1995 年停产。

黄酮: 一种通常存在于植物中的代谢物和杀线虫剂。

非诺贝特: 一种处方药,用于降低和治疗血液中的高胆固醇和甘油三酯(脂肪样物质)水平。

实验

探索性液相色谱分离

图2: 为了确认预先确定的化合物的存在,探索性 LC-UV 运行在纯化之前确认了药物化合物的存在。

制备液相色谱运行

根据 XNUMX 种目标化合物的阳性 ID 及其洗脱点,药物混合物即可在 puriFlash 上进行制备型 LC-UV 运行® 5.250 ELSD。 iELSD 包有助于纯化,从而能够检测无发色团的化合物(图 3)。

结果和验证

分离纯化结果

使用 Advion Interchim Scientific ex 确认分离化合物的身份expression® 紧凑型质谱仪,快速准确地识别感兴趣的化合物。

这些化合物的纯度可以使用分析级 HPLC 进行验证。

SOLATION®,一种用于检测大麻和大麻中重金属的新型 ICP-MS

介绍

大麻和大麻产品变得越来越多 可使用 提供 药用和娱乐用途 对有毒重金属进行常规检测 重要得多.  Advion Interchim Scientific 介绍了 SOLATION® ICP-MS 用于 的分析 重金属在 大麻植物和大麻产品样品。 虽然没有针对大麻中重金属的联邦指导方针,但大麻使用和生产合法的州有 采用 曝光 范围 和质量控制标准 用于砷、镉、汞, 和铅 基于 USP<233>. 在这里,我们报告结果 我们的样本分析sis 使用这些指南。 

方法

大麻花是在当地购买并精细研磨用于分析。 使用微波消解系统 (CEM Mars 6,马修斯,北卡罗来纳州)。 方法验证 提供 USP<233> 基于准确度、使用加标回收率、重复性 4.9分 六个独立消解重复的 %RSD 和耐用性,其中这 6 个重复由另一位分析人员、另一台仪器或另一天再次运行。 峰值水平基于定义的“行动水平” by 加利福尼亚州最大允许每日暴露 (PDE) 限值作为指导:铅 0.5 µg/g、砷和镉 0.2 µg/g 和汞 0.1 µg/g 用于定义 100% 加标水平。 样品的加标量也分别为作用水平的 50% 和 150%。 

初步数据

为了消化, 0.5 g (+/- 0.002g) 样品用 9mL 浓缩液处理。 HNO3 和 1mL 浓HCl 在微波容器中并允许 应对 对于15 分钟 在被封顶之前. 容器在微波炉中装载到转盘上 和“一键式”大麻方法,由 CEM 提供,是 用过的。 样品是 被带到200°C的 30分钟,在那里举行 10分钟,让其冷却。 结果是一种清澈、无颗粒的溶液。 慰藉® ICP-MS 用于 分析 样本 对于 As、Cd、 汞和铅 消化后 和稀释。 这 结果 显示 解决方案® ICP-MS 能够产生准确的值 由加标回收率测量 哪些是 70-150% 范围。  结果 来自 6 个独立的摘要 定义的限制 20% 相对标准差. 重复分析 6 个摘要 在另一天 显示 与初步结果吻合良好 字幕可视电话用于 25% RSD 规格. 由 USP<233 定义>。 总体结果 表明 SOLATION® ICP-MS 是一种有效的 用于分析大麻和大麻样品的仪器。

 

天然产物的大规模定向馏分收集:姜黄和绿茶提取物的例子

介绍

通过探索传统药物和发现药理学的新空间,天然产物一直是临床前药物发现的灵感来源。 天然产物的分离和表征仍然是药物发现的主要障碍。 分离通常在分析规模上进行,然后在尝试任何放大纯化之前对化合物进行充分表征。 通过高度特异性的 MS 数据纯化复杂天然产物混合物中的化合物的能力可以简化该过程的纯化和表征步骤。 在这里,快速色谱和制备色谱与 MS 检测相结合,以纯化绿茶和姜黄提取物中的天然产物。 

方法

绿茶中主要儿茶素和姜黄中主要姜黄素的分离是通过提取完成的。 提取绿茶叶,并使用 UPLC-MS 和分析标准分析粗品,以鉴定目标儿茶素,并开发合适的制备型 LC 方法进行分离。 提取姜黄粉,然后使用 Advion 的 Plate Express 通过 TLC-MS 分析 识别感兴趣的化合物并开发合适的快速色谱分离方法。 使用与 Advion 的 ex 相连的 Interchim 的 puriFlash 5.250 flash/prep 色谱系统,使用质量导向馏分收集对两种提取物进行纯化expression® 单四极质谱仪。 使用 XIC MS 通道检测目标化合物。 然后使用 HPLC-MS 测定分离化合物的纯度。

初步数据

我们能够成功地分离出姜黄中的 3 种主要姜黄素(姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素)和绿茶中的 5 种主要儿茶素 ((-)-表没食子儿茶素 (EGC)、(-)-表儿茶素 (EC)、(-) -表没食子儿茶素-3-没食子酸酯 (EGCG)、(-)-表儿茶素-3-没食子酸酯 (ECG) 和 (-)-没食子儿茶素没食子酸酯 (GCG),纯度高(≥95%)。   

使用 TLC (97:3 DCM:MeOH) 开发了等度快速色谱法 (97:3 DCM:MeOH) 以纯化姜黄素。 TLC板通过APCI分析 MS 使用 Plate Express 直接从板上提取斑点,无需样品制备。 使用带有 APCI 的提取离子色谱 (XIC) 通道收集馏分 多发性硬化症。 然后通过 ASAP 对馏分进行表征 使用 HPLC-MS 确定每个级分的 MS 和纯度。 

使用 HPLC-MS 和参考标准品开发了一种用于绿茶中儿茶素的制备型 LC 方法,以鉴定每种目标化合物。 使用水甲醇梯度并使用为感兴趣的化合物设置的 XIC 通道收集馏分。 通过 HPLC-MS 对馏分进行表征并确定其纯度。 EGC、EGCG、GCG 和 ECG 级分经测定分别具有 100%、99.8%、98.8 和 100% 的纯度。

Advion Interchim Scientific SOLATION® ICP-MS 简介

介绍

慰藉® 电感耦合等离子体质谱仪 (ICP-MS) 通过从内到外简化和优化典型的 ICP-MS 工作流程,让您掌握痕量多元素分析的强大功能。 该系统提供高性能、多元素分析,是环境、临床、生物医学、食品、农业和地质应用的理想选择。   

慰藉® 提供最先进的四极偏转器,可确保分析仪和检测器保持清洁,并通过防止中性和粒子进入分析仪来提高信噪比。 该系统还设计用于降低氩气消耗。 

关键系统基础设施包括:

  • 离子提取锥:三锥离子提取,然后是 Einzel 透镜,通过电控将离子最大限度地传输到真空系统中。 
  • RF 线圈:使用行业标准的 27 MHz 变频发生器通过水冷 RF 线圈产生等离子体,以实现快速阻抗匹配和具有挑战性的矩阵的最终性能。 
  • 手电筒:一体式可拆卸手电筒,可快速、一步连接氩气和点火器。 可选防护罩,防止二次放电。 
  • 雾化器:玻璃或石英材质的高效同心雾化器可与最广泛的流速和样品成分兼容。 
  • 雾化室:带有可选温度控制的旋风雾化室进一步减小了液滴尺寸和溶剂负荷,以确保稳定、高效的等离子体。 
  • 蠕动泵:集成的 4 通道、12 辊泵,具有最大的灵活性和超低脉动。 软件控制的流速从 1 μL/min 到 >1 mL/min。 
  • 闸阀:允许快速轻松地维护和更换锥体,同时保持真空完整性。 
  • 90°四极偏转器:确保分析仪和检测器不与等离子束对齐​​,防止中性和粒子进入分析仪,提高信噪比并防止污染。 
  • 八极碰撞池:用作离子导向器和与氦气的碰撞池,以提供动能鉴别 (KED) 以消除干扰。 
  • 四极杆分析仪:具有最高稳定性的高频质量过滤器设计,可同时最大化传输、分辨率和丰度灵敏度。 
  • 双功能检测器:在模拟和脉冲检测模式下进行测量,两者之间的无缝传输,允许在具有超过 9 个数量级的线性动态范围的单次分析中测量高电平和低电平。 
  • 脉冲检测: 捕获离子,产生短于 20 ns 的脉冲; 准确和线性,最小停留时间小于 100 μs 
  • 模拟检测: 用于更高的离子信号,同时禁用脉冲检测以延长检测器寿命。 
  • 质量相关软件控制:软件旨在独立优化特定质量范围,以实现质量特定调谐优化。  

使用 SOLATION® ICP-MS 分析大麻中的重金属

仪器仪表:SOLATION® ICP-MS

引言

随着美国、加拿大和其他几个国家对大麻和大麻的日益接受和合法化,大麻产品比以往任何时候都更广泛。 现在已被批准用于医疗、娱乐和保健补充剂用途,产量和消费量的增加凸显了对大麻植物材料中的有毒化学物质(包括重金属)及其所有副产品进行常规测试和制定测试标准的必要性,以确保为消费者提供安全的产品。  通过采用 <232> 和 <233> 章,美国药典 (USP) 根据药品的毒性和给药途径指定了元素列表和最大暴露限值。  

许多已将医疗和娱乐大麻合法化的州将其暴露限制建立在 USP 值上。  加利福尼亚州、科罗拉多州和马萨诸塞州是通过吸入对 As、Cd、Hg 和 Pb 进行允许每日暴露 (PDE) 限制的例子。 这些值汇总在表 1 中。 

表1: 使用 USP 指南进行吸入重金属暴露的州的 PDE 限制。 USP<233> 还定义了分析这些有毒元素所需的准确度、可重复性和耐用性:

验证标准

精度: 所研究的基质和材料必须添加浓度为最大允许日暴露量 (PDE) 50%、100% 和 150% 的目标元素。 每个目标元素的平均加标回收率必须在实际值的 70%-150% 之内。

重复性: 必须以定义和分析的目标限值的 100% 添加被调查材料的六个独立样品。 对于每个目标元素,测得的百分比相对标准偏差 (%RSD) 不得超过 20%。

坚固性: 通过在不同的日子、使用不同的仪器或由不同的分析师分析六种重复性测试解决方案来执行重复性测量测试程序。 对于每个目标元素,12 次重复的 %RSD 必须小于 25%。

在本研究中,我们使用了 Advion SOLATION® ICP-MS 和微波消解系统使用 USP 通则 <233> 中描述的验证方法消解和分析大麻样品。  灵敏度、处理复杂基质的能力以及用氦碰撞池消除干扰的能力使其成为大麻行业重金属分析的理想系统。

实验

样品制备

药用大麻花样品是在当地购买的。  将约 14 克精细研磨并均质化,然后将 0.5 克 +/- 0.005 克称重到消解容器中并加入适量的加标溶液。  将 3 mL 浓 HNO1 和 15 mL 浓 HCl 添加到每个容器中,让样品反应 XNUMX 分钟,然后将容器密封并将其放置在密闭容器微波消解系统的转盘上。  该程序控制微波能量,使样品在 200 分钟内上升到 20°C 的最佳消化温度,在 200°C 保持 10 分钟,然后冷却回室温。  

一旦在 18mL 容量瓶中用 50MΩ 水定容,该方法就可以完全消解所有样品,得到澄清、无颗粒的溶液。

校准标准和加标基于表 1 中的行动水平。  样品组包括一个大麻样品、一个重复样品、50%、100% 和 150% 加标,以及 NIST 1575 Pine 针以进一步验证结果,这些样品重复运行。  对于 USP<233> 的“坚固性”规格,有 6 个 100% 加标大麻样品。  表 2 总结了尖峰值。

表2: 基于 USP<233> 中定义的操作限制的峰值值

消化后进行第二次 1:4 稀释,使最终酸浓度达到 5%,总稀释系数为 400 倍。  校准空白和标准品使用相同的酸浓度,5% 的 9:1 HNO3/HCl,用于基质匹配。  为了稳定汞并帮助洗掉,添加了 20 倍汞浓度的金。  将内标添加到所有样品、标准品和空白中,最终浓度为 10 ng/g (ppb)。  标准浓度和内标汇总于表 3 中。

表3: 分析物质量、校准标准和内标。

控制系统

Advion SOLATION® ICP-MS 结合了强大的固态发生器、用于保持 MS 最敏感组件清洁的正交离子光学器件以及易于使用的控制和数据处理软件。 

由于在样品消解中使用了 HCl,因此存在大量的氯,这会对样品产生等压干扰 75来自 40Ar35Cl+.  碰撞池有效地消除了 ArCl+ 通过利用动能歧视 (KED) 将多原子干扰与分析物离子分离,从而对低浓度砷进行准确定量,从而生成 m/z 75 的信号。  砷是套件中唯一具有此类干扰的分析物,因此碰撞池不用于检测 Cd、Hg 或 Pb。  

安装在旋风雾化室上的玻璃同心雾化器连接到标准炬管,注射器内径为 2 毫米,用于进样。  仪器运行参数总结在表 4 中。

表4: ICP-MS 参数

结果和验证

样本结果

大麻中汞和铅的浓度低于最低标准,所有值均低于行动限值。 样品制备和分析一式两份,这些重复的平均值显示在表 5 中。为了满足耐用性要求,样品由两名不同的分析人员在不同的日子运行。

表5: 大麻样品结果(样品和重复的平均值)

精度: 样品加标浓度为 50%、100% 和
150% 的行动水平(上表 2)和计算的回收率。 加标回收率均在 92.5% – 114.1% 之间,完全在 USP 方法定义的 70-150% 范围内。

表6: 准确度 - 峰值回收率

重复性: 六个大麻样品以 100% 的作用水平加入并消化。 表 7 中汇总的结果表明,所测浓度的 %RSD 介于 1.3% – 3.7% 之间,表明重现性远低于 20% 的限值。

表7: USP<233> 重复性结果

坚固性: 重复性样品组是由不同的分析人员在不同的日子准备和运行的。 该次运行的结果与前一次运行相结合,以确定耐用性。 耐用性值与重复性值相似,测得的 %RSD (2.4 – 4.0%) 轻松低于 USP 方法定义的 25% 限值。 结果总结在表8中。

表8: USP<233> 坚固性结果

NIST 1575a 结果

NIST SRM 的结果总结在表 9 中。 As 和 Hg 的值小于
溶液中的低标准,但实验值和认证值之间有很好的一致性。

表9: NIST 1575a 松针 SRM

结论

本研究表明,Advion SOLATION® ICP-MS 与微波消解系统相结合,适用于对大麻植物材料中的重金属进行准确、稳健和可重现的分析——大大超过了 USP <233> 协议的要求。

NIST SRM 1575 Pine 获得的出色回收率结果加强了微波消解方法的验证。

在紧凑型质谱仪上无需样品制备即可直接对碳酸饮料进行样品分析

质谱:前expression® CMS
采样:尽快

引言

化学家的任务是快速识别生成的化合物、确保产品质量或评估安全性。 当前的技术是足够的,但并非所有技术都能提供 Advion ex 提供的速度、数据质量或易用性expression® 内容管理系统。 带有 Advion ASAP 的 CMS 使化学家能够快速分析固体、液体和粉末,而无需进行繁琐和耗时的样品制备。

方法

ASAP 的加长玻璃毛细管浸入每个碳酸饮料样品中。 擦去多余的部分,将探针直接插入 CMS 的 ASAP 启用的 APCI 离子源,在几秒钟内产生结果。

图1:包含样品的 ASAP 直接插入到 CMS 的 ASAP 启用的 APCI 源中进行分析。

图2:用于 APCI-CMS 分析的 ASAP 采样探针示意图。

结果

概要

ASAP/CMS 分析可在 < 1 分钟内提供数据,无需样品制备和色谱,使其成为反应监测、化合物鉴定、食品安全和天然产物分析的理想选择。

通过挥发性APCI(vAPCI)紧凑型质谱对奶酪进行分类

质谱:前expression® CMS
采样:vAPCI

引言

奶酪是世界上最受欢迎的食物类型之一,可供消费者选择的种类繁多。 我们通常吃来自牛、山羊和绵羊的奶酪。 奶酪的气味和风味是每种奶酪的特征,源于化学物质的复杂混合物,包括游离脂肪酸。 虽然这种混合物受到多种因素的影响,但我们可以使用质谱来表征不同类型奶酪的挥发性特征。

图1:(A)山羊奶酪,(B)蓝斯蒂尔顿,(C)红莱斯特,(D)温斯利代尔。
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图2:vAPCI 源入口系统的示意图。

在本应用笔记中,我们 展示 Advion ex 的能力expression® CMS 使用我们的挥发性 APCI (vAPCI) 离子源分析各种类型奶酪的挥发性脂肪酸。 通过加热奶酪样品,我们释放出各种挥发性化合物,主要是脂肪酸,并在没有任何样品制备或衍生化的情况下分析顶空。 然后我们进行了 sta统计分析,根据不同的挥发性特征对奶酪样品进行分组。

 

方法

将几种不同类型的奶酪在容器中加热至 70°C 并保持 2 小时,并使用带有 vAPCI 离子源的 CMS,使用溶剂流(10 mM4NH4OAc 溶于 1:1 MeOH:H2O)来帮助分析容器的顶部空间在电离。

虽然奶酪样品含有许多相同的脂肪酸,但肉眼不可见的离子将提供所需的信息来分离每种奶酪的轮廓。 为了寻找这些差异,我们对质谱进行了主成分分析 (PCA)。

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图3:一系列常见于不同奶酪中的脂肪酸。

结果与讨论

质谱图显示,加热后,每个奶酪样品都会产生多种脂肪酸(图 3)。 每个奶酪样品都含有许多相同的脂肪酸(表 1)。

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图4:四种奶酪的代表性样品的质谱图:(A) 山羊奶酪、(B) Blue Stilton、(C) Red Leicester 和 (D) Wensleydale。

表1:使用 vAPCI 分析奶酪样品观察到的脂肪酸。

PCA 是一种统计工具,用于在数据中寻找模式。 结果图(图 6)显示了基于样本之间相似或不同程度的分组。 通过对来自每种奶酪的多个样品的数据进行 PCA,我们发现不同的奶酪确实可以根据它们的质谱进行分组,从而允许使用 vAPCI 分析进行快速识别。 例如,各种山羊奶酪在统计上具有相似的光谱,因此在 PCA 图中组合在一起。 这通常适用于每种类型的奶酪。

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图6:奶酪挥发性曲线的 PCA。

每种奶酪的质谱都是特征性的; 不仅每种奶酪中奶酪样品的光谱相似,而且所分析的不同类型奶酪之间的光谱也大不相同。

结论

我们使用了 Advion exexpression® 带有 vAPCI 离子源的 CMS 可分析加热奶酪样品释放的蒸汽中的脂肪酸,无需任何额外的样品制备或衍生。 此外,我们使用 PCA 来显示每种奶酪的光谱是该类型奶酪的特征,这使我们能够按类型对不同的奶酪样品进行分类。 这将进一步使我们能够使用简单的挥发性质谱仪设置按类型识别奶酪。

啤酒发酵过程中挥发性成分的分析

质谱:前expression® CMS
采样:vAPCI

引言

酒精饮料的化学分析是质量控制的一个重要步骤,用于监控各批次的风味特征、研究产品随时间的化学变化,并确定任何问题的根源(例如异味)。

啤酒的复杂风味主要是由所用成分、酿造方法和发酵过程中的条件决定的,在整个过程中对啤酒进行分析对于监测发酵和确定发生问题的点是非常宝贵的。 作为全球消费最广泛的饮料之一,快速可靠的分析技术对于跟上需求和生产的步伐至关重要。

气相或液相色谱-质谱(分别为 GC/MS 或 LC/MS)传统上用于烈酒和饮料行业的质量控制; 然而,这些技术可能相对耗时,并且对于快速、高通量分析来说不一定是理想的。

方法

图1: Advion前expression® 带有 vAPCI 传热线的 CMS。page2image34676944

图2: vAPCI/CMS 的示意图。

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除了花叶酒花叶 (1 g) 外,还在发酵过程 12 小时、4 天和 14 天后收集并分析了等份的自制啤酒 (1 mL)。 自制啤酒还含有 simcoe 和 citra 啤酒花,但未对其进行分析。

将每个等分试样密封在玻璃小瓶中并加热至 70oC 10 分钟。 顶空通过 vAPCI 源的文丘里效应直接吸入 CMS 进行分析。 在 30-300 m/z 范围内以正离子模式分析样品,扫描时间为 400 ms。

结果与讨论

图3: (A) 12 小时、(B) 4 天和 (C) 14 天)自制酒顶空的质谱图。

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整体挥发性特征有明显变化,特别是 m/z 93 离子逐渐增加,可能是质子化乙醇二聚体(图 3)。 该离子的浓度在第 4 天的时间点达到稳定水平,表明发酵主要发生在前几天。

图4: 花叶啤酒花的质谱图,添加到发酵 4 天。

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还分析了此自制啤酒中使用的马赛克啤酒花的顶部空间。 啤酒花质谱图(图 4)主要由 m/z 81、137 和 273 处的离子主导,所有这些离子都是与萜烯相关的常见离子,萜烯是导致啤酒花的许多香气和风味的一类化合物。 许多这些化合物具有相同的分子量,因此需要进一步分析来区分和鉴定这些成分。 在啤酒等分试样中很容易检测到来自啤酒花的成分,特别是在 4 天时间点之后,当添加额外的啤酒花时。

结论

本研究展示了 Advion ex 的使用expression® 带有 vAPCI 的 CMS,用于分析自酿啤酒和啤酒花顶部空间的挥发性化合物。 该仪器的文丘里辅助界面能够快速采样挥发物,从而可以在整个发酵过程中观察自制酒的挥发谱变化。 这种简单的方法适用于酒精饮料生产过程中的快速质量控制。

槲寄生:爱之吻还是死亡之吻? 将薄层色谱与紧凑型质谱联用

槲寄生

质谱:前expression CMS
采样:Plate Express™ 

 本着假日季节的精神并确保槲寄生之吻令人愉快且“无毒”,我们采用了 Advion Interchim Scientific expRESSion® 紧凑型质谱仪 (CMS) 和 Plate Express™ TLC 读板机用于分析槲寄生乙醇提取物的商业酊剂,以确定槲寄生提取物中是否存在酪胺。 

引言 

一枝槲寄生象征着浪漫的传统(图 1),民间传说认为槲寄生的提取物可以治疗癌症以及其他一长串已报道的健康益处。 然而,槲寄生也被认为是致命的。 槲寄生被称为“死亡之吻”,有人说槲寄生的毒性非常大,如果人类摄入树叶或浆果,就会被杀死。 

图1: 槲寄生的传统。
槲寄生

报告的毒性让我们想知道,为什么或如何供应商出售槲寄生提取物供有目的的人类消费? 据报道,槲寄生中的一种槲寄生含有有毒生物碱酪胺,可导致视力模糊、恶心、腹痛、腹泻、血压变化,甚至死亡。 对同行评审的科学文献的搜索揭示了槲寄生中酪胺的存在缺乏可靠的分析支持。 

本着假日季节的精神,并确保槲寄生亲吻得到享受且“无毒”,我们采用了 Advion Interchim Scientific TLC/CMS 系统(图 2)来分析槲寄生乙醇提取物的商业酊剂,以确定是否含有酪胺存在于槲寄生的提取物中。

图2: Advion Interchim Scientific ex 的实验装置expression® 带有 Plate Express TLC 读板机的 CMS。
CMS 和 Plate Express
图3: 使用的实验草药。
槲寄生药草

实验 

槲寄生酊剂购自 Indigo Herbs。 根据众所周知的程序,将此酊剂样品的一小部分用丹磺酰氯在 50 ºC 下衍生化 30 分钟[1]. 类似地,以相同的方式衍生了真实的酪胺样品以形成其丹磺酰基衍生物。 

将一小部分 (10 mL) 的标准酪胺丹酰衍生物加到 Merck Silica gel G TLC 板的外侧泳道(泳道 1 和 4)上。 将一部分槲寄生衍生酊剂应用于泳道 2,将掺有酪胺丹酰衍生物的槲寄生衍生酊剂应用于泳道 3(图 4)。 

图4: 在长波长紫外光下显影和可视化后的 TLC 板。 泳道 1 和 4:标准酪胺的丹磺酰衍生物。 泳道2:槲寄生酊剂样品的丹磺酰衍生物反应混合物。 泳道 3:酊剂提取丹酰衍生物,其中掺入标准酪胺丹酰衍生物。 (A) 酪胺丹酰衍生物的 Rf=0.3。 (B) 丹磺酰氯的 Rf=0.6。
槲寄生结果

风干的 TLC 板在含有氯仿/乙酸乙酯 (8/2, v/v) 的平衡溶剂罐中展开。 然后在长波长紫外光下观察展开的 TLC 板以显示分离的组分(图 3)。 将 TLC 板放置在 Plate Express TLC 读板机上,由此可以通过 TLC/CMS 单独分析每个 TLC“点”。 

参考图 4,TLC/CMS 分析很容易表明两个外侧泳道(泳道 0.3 和 1)中的 Rf 4 点产生了具有丰富的质谱 m / z 371 与预期的酪胺丹酰衍生物质子化分子一致(图 5A)。 从在泳道 0.6 和 1 中观察到的 Rf=4 的点获得的 TLC/CMS 质谱与未反应的丹磺酰氯与质子化分子在 m / z 270(数据未显示)。 TLC/CMS 分析第 2 道中 Rf=0.3 的斑点,没有证据表明存在酪胺丹酰衍生物(图 5B)。 

图5: (A) 在图 0.3 泳道 4 中的 Rf=1 处观察到的标准酪胺丹酰衍生物的 TLC/CMS 质谱图。(B) 在图 0.3 泳道 4 中的 Rf=2 处观察到的槲寄生酊衍生化酊剂的 LC/CMS 质谱图。 

槲寄生光谱

在没有 TLC/CMS 分析的情况下,可以得出结论,第 0.3 道中 Rf=2 处的点是由于槲寄生酊剂样品中存在酪胺所致。 在图 0.3 的泳道 3 中观察到的强化酊提取物的 Rf=4 点很容易显示出与图 5A 中所示的酪胺丹酰衍生物相同的质谱图。 从槲寄生叶产品的醇提取物中获得了相同的酪胺阴性结果。 

结论 

这项简短研究的结果表明,酊剂样品中的酪胺含量非常低且低于我们的检测限,或者样品中不存在酪胺。 合成化学家和法医化学家通常采用 TLC 技术作为快速、简单的样品筛查,以确定预期化学物质的存在。 与显示相同 Rf 值的已知样品进行比较,通常可以为报告预期化合物的存在提供一些可信度。 然而,正如这个例子所暗示的那样,当具有相同的 Rf 值时,类似的 Rf 值并不能保证点身份的确认。 如此处所示,使用 Advion Interchim Scientific ex 访问现场的直接分析expression® CMS 可以证实预期的鉴定,或者在这种情况下,表明具有相同 Rf 值的点不是预期的化合物。 这些结果可以解释为什么商业槲寄生酊剂样品对药用无害。 那你该怎么办? 槲寄生并不致命。 但它可能是危险的,所以不要吃它。 只需'在它下面偷一个吻'! 

参考文献和致谢 

[1]Mullins, Donald E. 和 Eaton, John L. 生物胺丹磺酰基衍生物的定量高效薄层色谱,肛门。 Biochem., 1988, 172, (484-487)。 

感谢 Chief Elf、Nigel Sousou 博士领导样品分析过程。 

puriFlash-MS在正常相条件下的天然产物靶向分离

介绍

分析技术和方法工具的改进在天然产物研究中表征和分离生物活性次生代谢产物中起着重要作用。 反相液相色谱-质谱(RP-LC-MS)被广泛用于分析水平的复杂天然提取物的代谢物谱分析,并且越来越多地用于生物标志物的目标MS分离。 正相色谱法(NP-LC)非常适合纯化极性次级代谢产物,与RP相比,它们还具有一些优势,例如低操作压力和最便宜的固定相。

但是,NP-LC通常不适用于MS偶联。 已在Advion X Interchim上研究了使用通用分离方法制备规模的NP-LC-APCI-MS代谢物纯化的潜力 PuriFlash®– CMS系统 鉴于其可用于亲脂性次生代谢物的目标MS分离。 在模拟实际隔离情况的条件下,使用三种代表性的非极性天然产物的混合物来优化分离,分裂和MS电离。 最后,成功分离了当归二氯甲烷根提取物的非极性成分。

通过正相Flash-CMS快速分离代表性的非极性天然产物混合物

在12 g和25 g正相快速色谱柱上纯化天然产物混合物

三种市售标准品(石竹烯氧化物,凯尔琳和α-桑顿宁)用于评估puriFlash-CMS系统作为从粗植物提取物中快速纯化亲脂性化合物的工具的适用性。

四个色谱图显示了制备规模的混合物曲线,在两个色谱柱尺寸上具有快速梯度,并且UV和MS信号具有良好的重叠。

所有参数均经过仔细优化,以进行分离和检测。 采取了特别谨慎的措施来寻找电离和分裂条件,以提供良好的检测和

Flash-MS指导的给定化合物的纯化

柱后补水稀释方案

puriFlash-CMS系统

对于APCI来源,正相溶剂高度易燃,由于加热过程应避免使用。

为了获得有效和安全的电离,必须对柱后进行优化稀释。 当到达MS检测器时,溶剂混合物的ACN或MeOH浓度均> 99%。

发现APCI-MS检测具有最佳的分离条件,并在柱后进行了适当溶剂的洗脱是可靠的,并且非常适合此类纯化。

当归当归根提取物的正相puriFlash-CMS纯化

分析型HPLC-UV

分析规模:

制备规模:

闪光制备型UV-ELSD-MS

当归的根富含香豆素衍生物。 除了紫外检测外,MS-ELSD检测还可以监测无或弱发色团的次生代谢物,而MS的选择性对于精确收集部分共洗脱化合物非常有帮助。

总结

正相快速纯化代表了一种有效的策略,可基于代谢物谱分析结果合理分离特定的亲脂性生物标志物或生物活性化合物。 除标准的紫外线检测外,MS触发的分馏和ELSD监测是用于精确收集和估算分离出的化合物数量的强大工具。 MS对于任何给定的特定集合特别有用 m / z 如果使用高载量和低峰容量色谱方法在原油提取物中经常发生共洗脱。

这种快速而合理的方法可广泛用于一步纯化和分离合成和天然混合物。 它也可用于检测缺乏发色团的非极性化合物,这在天然产物研究中非常常见。 以制备规模进行的分离可以纯化数十至数百毫克的化合物,以进行进一步的结构鉴定和生物活性评估。

參考資料

戴维·里吉(Davide Righi)1安东尼奥·阿佐利尼1,爱默生·费雷拉·奎洛兹1,让·卢克·沃尔芬德1
日内瓦大学药学院,洛桑大学,奎伊·内斯特·安塞梅特大街30号,1211日内瓦4,瑞士
[1] Davy Guillarme,Dao TT Nguyen,Serge Rudaz,Jean-Luc Veuthey,Eur。 J. Pharma。 生物制药。 2008,68,430