天然产物的大规模定向馏分收集:姜黄和绿茶提取物的例子

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介绍

通过探索传统药物和发现药理学的新空间,天然产物一直是临床前药物发现的灵感来源。 天然产物的分离和表征仍然是药物发现的主要障碍。 分离通常在分析规模上进行,然后在尝试任何放大纯化之前对化合物进行充分表征。 通过高度特异性的 MS 数据纯化复杂天然产物混合物中的化合物的能力可以简化该过程的纯化和表征步骤。 在这里,快速色谱和制备色谱与 MS 检测相结合,以纯化绿茶和姜黄提取物中的天然产物。 

方法

绿茶中主要儿茶素和姜黄中主要姜黄素的分离是通过提取完成的。 提取绿茶叶,并使用 UPLC-MS 和分析标准分析粗品,以鉴定目标儿茶素,并开发合适的制备型 LC 方法进行分离。 提取姜黄粉,然后使用 Advion 的 Plate Express 通过 TLC-MS 分析 识别感兴趣的化合物并开发合适的快速色谱分离方法。 使用与 Advion 的 ex 相连的 Interchim 的 puriFlash 5.250 flash/prep 色谱系统,使用质量导向馏分收集对两种提取物进行纯化expression® 单四极质谱仪。 使用 XIC MS 通道检测目标化合物。 然后使用 HPLC-MS 测定分离化合物的纯度。

初步数据

我们能够成功地分离出姜黄中的 3 种主要姜黄素(姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素)和绿茶中的 5 种主要儿茶素 ((-)-表没食子儿茶素 (EGC)、(-)-表儿茶素 (EC)、(-) -表没食子儿茶素-3-没食子酸酯 (EGCG)、(-)-表儿茶素-3-没食子酸酯 (ECG) 和 (-)-没食子儿茶素没食子酸酯 (GCG),纯度高(≥95%)。   

使用 TLC (97:3 DCM:MeOH) 开发了等度快速色谱法 (97:3 DCM:MeOH) 以纯化姜黄素。 TLC板通过APCI分析 MS 使用 Plate Express 直接从板上提取斑点,无需样品制备。 使用带有 APCI 的提取离子色谱 (XIC) 通道收集馏分 多发性硬化症。 然后通过 ASAP 对馏分进行表征 使用 HPLC-MS 确定每个级分的 MS 和纯度。 

使用 HPLC-MS 和参考标准品开发了一种用于绿茶中儿茶素的制备型 LC 方法,以鉴定每种目标化合物。 使用水甲醇梯度并使用为感兴趣的化合物设置的 XIC 通道收集馏分。 通过 HPLC-MS 对馏分进行表征并确定其纯度。 EGC、EGCG、GCG 和 ECG 级分经测定分别具有 100%、99.8%、98.8 和 100% 的纯度。