槲寄生:爱之吻还是死亡之吻? 将薄层色谱与紧凑型质谱联用

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槲寄生

质谱:前expression® CMS
采样:Plate Express™ 

 本着节日的精神,并确保槲寄生的亲吻得到享受并且“无毒”,我们采用了 Advion Interchim Scientific exexpression® 紧凑型质谱仪 (CMS) 和 Plate Express™ TLC 读板机用于分析槲寄生乙醇提取物的商业酊剂,以确定槲寄生提取物中是否存在酪胺。 

引言 

一枝槲寄生象征着浪漫的传统(图 1),民间传说认为槲寄生的提取物可以治疗癌症以及其他一长串已报道的健康益处。 然而,槲寄生也被认为是致命的。 槲寄生被称为“死亡之吻”,有人说槲寄生的毒性非常大,如果人类摄入树叶或浆果,就会被杀死。 

图1: 槲寄生的传统。
槲寄生

报告的毒性让我们想知道,为什么或如何供应商出售槲寄生提取物供有目的的人类消费? 据报道,槲寄生中的一种槲寄生含有有毒生物碱酪胺,可导致视力模糊、恶心、腹痛、腹泻、血压变化,甚至死亡。 对同行评审的科学文献的搜索揭示了槲寄生中酪胺的存在缺乏可靠的分析支持。 

本着假日季节的精神,并确保槲寄生亲吻得到享受且“无毒”,我们采用了 Advion Interchim Scientific TLC/CMS 系统(图 2)来分析槲寄生乙醇提取物的商业酊剂,以确定是否含有酪胺存在于槲寄生的提取物中。

图2: Advion Interchim Scientific ex 的实验装置expression® 带有 Plate Express™ TLC 读板机的 CMS。
CMS 和 Plate Express
图3: 使用的实验草药。
槲寄生药草

实验 

槲寄生酊剂购自 Indigo Herbs。 根据众所周知的程序,将此酊剂样品的一小部分用丹磺酰氯在 50 ºC 下衍生化 30 分钟[1]. 类似地,以相同的方式衍生了真实的酪胺样品以形成其丹磺酰基衍生物。 

将一小部分 (10 mL) 的标准酪胺丹酰衍生物加到 Merck Silica gel G TLC 板的外侧泳道(泳道 1 和 4)上。 将一部分槲寄生衍生酊剂应用于泳道 2,将掺有酪胺丹酰衍生物的槲寄生衍生酊剂应用于泳道 3(图 4)。 

图4: 在长波长紫外光下显影和可视化后的 TLC 板。 泳道 1 和 4:标准酪胺的丹磺酰衍生物。 泳道2:槲寄生酊剂样品的丹磺酰衍生物反应混合物。 泳道 3:酊剂提取丹酰衍生物,其中掺入标准酪胺丹酰衍生物。 (A) 酪胺丹酰衍生物的 Rf=0.3。 (B) 丹磺酰氯的 Rf=0.6。
槲寄生结果

风干的 TLC 板在含有氯仿/乙酸乙酯 (8/2, v/v) 的平衡溶剂罐中展开。 然后在长波紫外光下观察显影的 TLC 板以显示分离的组分(图 3)。 将 TLC 板放置在 Plate Express™ TLC 读板器上,由此可以通过 TLC/CMS 单独分析每个 TLC“点”。 

参考图 4,TLC/CMS 分析很容易表明两个外侧泳道(泳道 0.3 和 1)中的 Rf 4 点产生了具有丰富的质谱 m / z 371 与预期的酪胺丹酰衍生物质子化分子一致(图 5A)。 从在泳道 0.6 和 1 中观察到的 Rf=4 的点获得的 TLC/CMS 质谱与未反应的丹磺酰氯与质子化分子在 m / z 270(数据未显示)。 TLC/CMS 分析第 2 道中 Rf=0.3 的斑点,没有证据表明存在酪胺丹酰衍生物(图 5B)。 

图5: (A) 在图 0.3 泳道 4 中的 Rf=1 处观察到的标准酪胺丹酰衍生物的 TLC/CMS 质谱图。(B) 在图 0.3 泳道 4 中的 Rf=2 处观察到的槲寄生酊衍生化酊剂的 LC/CMS 质谱图。 

槲寄生光谱

在没有 TLC/CMS 分析的情况下,可以得出结论,第 0.3 道中 Rf=2 处的点是由于槲寄生酊剂样品中存在酪胺所致。 在图 0.3 的泳道 3 中观察到的强化酊提取物的 Rf=4 点很容易显示出与图 5A 中所示的酪胺丹酰衍生物相同的质谱图。 从槲寄生叶产品的醇提取物中获得了相同的酪胺阴性结果。 

结论 

这项简短研究的结果表明,酊剂样品中的酪胺含量非常低且低于我们的检测限,或者样品中不存在酪胺。 合成化学家和法医化学家通常采用 TLC 技术作为快速、简单的样品筛查,以确定预期化学物质的存在。 与显示相同 Rf 值的已知样品进行比较,通常可以为报告预期化合物的存在提供一些可信度。 然而,正如这个例子所暗示的那样,当具有相同的 Rf 值时,类似的 Rf 值并不能保证点身份的确认。 如此处所示,使用 Advion Interchim Scientific ex 访问现场的直接分析expression® CMS 可以证实预期的鉴定,或者在这种情况下,表明具有相同 Rf 值的点不是预期的化合物。 这些结果可以解释为什么商业槲寄生酊剂样品对药用无害。 那你该怎么办? 槲寄生并不致命。 但它可能是危险的,所以不要吃它。 只需'在它下面偷一个吻'! 

参考文献和致谢 

[1]Mullins, Donald E. 和 Eaton, John L. 生物胺丹磺酰基衍生物的定量高效薄层色谱,肛门。 Biochem., 1988, 172, (484-487)。 

感谢 Chief Elf、Nigel Sousou 博士领导样品分析过程。