介绍

分析技术和方法工具的改进在天然产物研究中表征和分离生物活性次生代谢产物中起着重要作用。 反相液相色谱-质谱（RP-LC-MS）被广泛用于分析水平的复杂天然提取物的代谢物谱分析，并且越来越多地用于生物标志物的目标MS分离。 正相色谱法（NP-LC）非常适合纯化极性次级代谢产物，与RP相比，它们还具有一些优势，例如低操作压力和最便宜的固定相。

但是，NP-LC通常不适用于MS偶联。 已在Advion X Interchim上研究了使用通用分离方法制备规模的NP-LC-APCI-MS代谢物纯化的潜力 PuriFlash®– CMS系统 鉴于其可用于亲脂性次生代谢物的目标MS分离。 在模拟实际隔离情况的条件下，使用三种代表性的非极性天然产物的混合物来优化分离，分裂和MS电离。 最后，成功分离了当归二氯甲烷根提取物的非极性成分。

通过正相Flash-CMS快速分离代表性的非极性天然产物混合物

在12 g和25 g正相快速色谱柱上纯化天然产物混合物

三种市售标准品（石竹烯氧化物，凯尔琳和α-桑顿宁）用于评估puriFlash-CMS系统作为从粗植物提取物中快速纯化亲脂性化合物的工具的适用性。

四个色谱图显示了制备规模的混合物曲线，在两个色谱柱尺寸上具有快速梯度，并且UV和MS信号具有良好的重叠。

所有参数均经过仔细优化，以进行分离和检测。 采取了特别谨慎的措施来寻找电离和分裂条件，以提供良好的检测和

Flash-MS指导的给定化合物的纯化

柱后补水稀释方案

puriFlash-CMS系统

对于APCI来源，正相溶剂高度易燃，由于加热过程应避免使用。

为了获得有效和安全的电离，必须对柱后进行优化稀释。 当到达MS检测器时，溶剂混合物的ACN或MeOH浓度均> 99％。

发现APCI-MS检测具有最佳的分离条件，并在柱后进行了适当溶剂的洗脱是可靠的，并且非常适合此类纯化。

当归当归根提取物的正相puriFlash-CMS纯化

分析型HPLC-UV

分析规模：

制备规模：

闪光制备型UV-ELSD-MS

当归的根富含香豆素衍生物。 除了紫外检测外，MS-ELSD检测还可以监测无或弱发色团的次生代谢物，而MS的选择性对于精确收集部分共洗脱化合物非常有帮助。

结论

正相快速纯化代表了一种有效的策略，可基于代谢物谱分析结果合理分离特定的亲脂性生物标志物或生物活性化合物。 除标准的紫外线检测外，MS触发的分馏和ELSD监测是用于精确收集和估算分离出的化合物数量的强大工具。 MS对于任何给定的特定集合特别有用 m / z 如果使用高载量和低峰容量色谱方法在原油提取物中经常发生共洗脱。

这种快速而合理的方法可广泛用于一步纯化和分离合成和天然混合物。 它也可用于检测缺乏发色团的非极性化合物，这在天然产物研究中非常常见。 以制备规模进行的分离可以纯化数十至数百毫克的化合物，以进行进一步的结构鉴定和生物活性评估。

参考资料

戴维·里吉（Davide Righi）¹安东尼奥·阿佐利尼¹，爱默生·费雷拉·奎洛兹¹，让·卢克·沃尔芬德¹
日内瓦大学药学院，洛桑大学，奎伊·内斯特·安塞梅特大街30号，1211日内瓦4，瑞士
[1] Davy Guillarme，Dao TT Nguyen，Serge Rudaz，Jean-Luc Veuthey，Eur。 J. Pharma。 生物制药。 2008，68，430

了解有关puriFlash-CMS的更多信息