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增强流动性液相色谱：从分析分离到制备分离的规模放大指南

默克公司

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超临界流体色谱仪（SFC）仪器的发展，改进的检测能力和扩大的修饰剂范围已导致SFC的应用范围扩展到对映体选择性分离之外的更广泛分析物的分析。但是，制备型SFC尚未实现同样的技术革新，特别是在高极性分析物的纯化方面。增强流动性液相色谱（EFLC）已被证明是将SFC仪器的适用范围扩展到高极性分析物（例如蛋白质，碳水化合物和核苷酸）的方法之一。尽管EFLC最近用于挑战性的亲水性代谢物和类似物的混合物，但其在制备纯化中的可行性（对于制药业至关重要）仍然未知。在此，研究了对实现可行的EFLC纯化方法至关重要的多个色谱参数，包括系统压力与改性剂组成的函数关系（对于几种MeOH：H₂O比），稀释剂注入条件对峰形的影响，以及使用稀释剂组成优化质量负载。使用50％的乙腈或甲醇稀释剂可提供最大的体积负载能力。在蔗糖的情况下，利用较高的分析物在水中的溶解度被证明比具有较高有机物含量的稀释剂的体积负载容量更有利。实际上，可以在80 cm制备型HILIC色谱柱上注射2 mg蔗糖，而峰形降解最小。结合的信息导致使用易于获得的MS定向SFC仪器成功地演示了EFLC用于糖的制备分离。