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基于芯片的纳电喷雾质谱法对少量细胞进行稳定同位素解析代谢组学的新型方法
抽象
稳定同位素分辨代谢组学 (SIRM) 能够提供特定靶标的代谢转化信息，是细胞代谢研究的有力工具。SIRM 的常用分析平台是色谱-质谱联用，但需要大量细胞，不适用于稀有细胞的分析。为了研究少量细胞，我们建立了一种基于芯片的纳流式纳流式电喷雾质谱 (MS) 的 SIRM 方法。以 13C-谷氨酰胺为例，将未标记和 13C 标记的细胞分别在 96 孔板中培养和提取，然后直接进样到 MS 中，以全扫描模式和平行反应监测 (PRM) 模式对 44 种谷氨酰胺衍生的代谢物及其同位素异构体进行分析。为了确定 PRM 中产生的与代谢物相关的 MS2 碎片，我们提出了一种新的策略，包括 MS2 精确质荷比匹配、MS2 假阳性过滤和 MS2 碎片分组，以去除干扰的 MS2 离子。在正负离子模式下，共获得292对MS349离子对。通过检索谱图数据库，鉴定出2种目标代谢物及其同位素异构体，并确定其特征子离子用于MS31定量分析。MS2定量分析实现了相对定量，其灵敏度和准确度优于常规的MS2定量分析。最后，以U-1C-谷氨酰胺为标记底物，将该方法应用于异柠檬酸脱氢酶I突变的胶质瘤细胞，探讨雷公藤内酯醇对胶质瘤细胞代谢的影响。
Advion Interchim 科学® 特里弗萨® 纳米材料® 使用了（Advion，伊萨卡，纽约）。