Recolección masiva de fracciones de productos naturales: ejemplos de extracto de cúrcuma y té verde
Introducción
Los productos naturales han sido una fuente de inspiración para el descubrimiento de fármacos preclínicos tanto para explorar las medicinas tradicionales como para descubrir nuevos espacios en la farmacología. El aislamiento y la caracterización de productos naturales sigue siendo una barrera importante en el descubrimiento de fármacos. El aislamiento generalmente se realiza a escala analítica y luego los compuestos se caracterizan completamente antes de intentar cualquier purificación a escala. La capacidad de purificar compuestos en mezclas complejas de productos naturales mediante datos de MS altamente específicos permite simplificar los pasos de purificación y caracterización del proceso. Aquí, la cromatografía flash y de preparación se combinan con la detección de MS para purificar productos naturales en extractos de té verde y cúrcuma.
Métodos
El aislamiento de las principales catequinas del té verde y los principales curcuminoides de la cúrcuma se completó mediante extracciones. Se extrajeron hojas de té verde y el material crudo se analizó mediante UPLC-MS y estándares analíticos para identificar las catequinas de interés y desarrollar un método de prep-LC adecuado para el aislamiento. El polvo de cúrcuma se extrajo y luego se analizó por TLC-MS usando Advion's Plate Express™ para identificar los compuestos de interés y desarrollar un método de cromatografía ultrarrápida adecuado para el aislamiento. Ambos extractos se purificaron utilizando la recolección de fracciones dirigidas a la masa utilizando el sistema de cromatografía flash/prep puriFlash 5.250 de Interchim conectado al ex de Advion.prensaion® espectrómetro de masas de un solo cuadrupolo. Los compuestos objetivo se detectaron usando canales XIC MS. A continuación, se determinó la pureza de los compuestos aislados usando HPLC-MS.
Datos preliminares
Pudimos aislar con éxito los 3 curcuminoides principales (curcumina, demetoxicurcumina y bisdemetoxicurcumina) en la cúrcuma y las 5 catequinas principales en el té verde ((-)-epigalocatequina (EGC), (-)-epicatequina (EC), (-) -epigalocatequina-3-galato (EGCG), (-)-epicatequina-3-galato (ECG) y (-)-galocatequina galato (GCG) con alta pureza (≥95%).
Se desarrolló un método de cromatografía ultrarrápida isocrática (97:3 DCM:MeOH) usando TLC (97:3 DCM:MeOH) para purificar los curcuminoides. La placa de TLC fue analizada por APCI– MS utilizando Plate Express, que extrae manchas directamente de la placa sin necesidad de preparación de la muestra. Las fracciones se recolectaron utilizando canales de cromatograma de iones extraídos (XIC) con APCI– SRA. Luego se caracterizaron las fracciones por ASAP– La MS y la pureza de cada fracción se determinaron usando HPLC-MS.
Se desarrolló un método de CL preparativo para las catequinas del té verde utilizando HPLC-MS y estándares de referencia para identificar cada compuesto de interés. Usando un gradiente de metanol en agua y recolectando fracciones usando canales XIC establecidos para los compuestos de interés. Las fracciones se caracterizaron y su pureza se determinó por HPLC-MS. Se determinó que las fracciones de EGC, EGCG, GCG y ECG tenían purezas del 100 %, 99.8 %, 98.8 y 100 %, respectivamente.
