Purificación de péptidos: acoplamiento Flash-MS utilizando puriFlash 5.250P y expresión CMS
Para adaptarse, Interchim instaló un laboratorio para poder realizar demostraciones en línea. Estas demostraciones se pueden articular en torno a purificaciones de productos "estándar" para demostrar el potencial de nuestros instrumentos. Este ejemplo demuestra las capacidades de un sistema flash-ms con Interchim puriFlash 5.250 y Advion exprensaion Espectrómetro de masas compacto (CMS) para la purificación de un péptido.
Instalación
Para la purificación de un péptido resultante de la síntesis química, utilizamos el puriFlash 5.250P. Para monitorear esta purificación, usamos un detector UV y Advion exprensaion CMS.
La detección de péptidos por espectrometría de masas se realiza con una fuente ESI, que es ideal para la detección de moléculas grandes como péptidos. La interfaz MS "desvía" una pequeña cantidad de producto para su detección.
Análisis de inyección de flujo (FIA)
Inyección directa de muestra cruda en el exprensaion CMS.
Aquí están los espectros de masas resultantes:
Observamos un pico en m / z 643, que corresponde a la molécula de interesada cargada 3 veces (M + 3H)3+, así como un pico en m / z 964.3, que corresponde a la molécula de interés cargada 2 veces (M + 2H)2+.
Condiciones de HPLC
Aquí están los resultados:
Transposición y purificación
Se utilizó una columna de péptidos con una columna preparativa: PFB5C18T-150/212.
En primer lugar, el método de HPLC analítica se traspuso a un método de HPLC preparativa.
Luego, se incrementó la concentración de la muestra inyectada para poder purificar la cantidad máxima de producto en una sola corrida.
Gracias al sistema puriFlash 5.250P junto con el exprensaion CMS, el producto de interés se purificó y recogió en base a su masa.