PuriFlash-MS Aislamiento específico de productos naturales en condiciones de fase normal
Introducción
La mejora de las técnicas analíticas y las herramientas metodológicas juega un papel importante en la caracterización y aislamiento de metabolitos secundarios bioactivos en la investigación de productos naturales. La cromatografía líquida de fase inversa-espectrometría de masas (RP-LC-MS) se utiliza ampliamente para la elaboración de perfiles de metabolitos de extractos naturales complejos a nivel analítico y se utiliza cada vez más para el aislamiento selectivo de biomarcadores por EM. La cromatografía de fase normal (NP-LC) es muy adecuada para la purificación de metabolitos secundarios polares y ofrece también algunas ventajas en comparación con la RP, como presiones de funcionamiento bajas y fases estacionarias más baratas.
Sin embargo, NP-LC no suele ser adecuado para el acoplamiento de MS. El potencial de NP-LC-APCI-MS para la purificación de metabolitos a escala preparativa utilizando métodos de separación genéricos se ha investigado en un Advion X Interchim PuriFlash® - sistema CMS en vista de su aplicación para el aislamiento selectivo de MS de metabolitos secundarios lipofílicos. Se utilizó una mezcla de tres productos naturales apolares representativos para optimizar la separación, la escisión y la ionización por EM en condiciones que imitan los casos de aislamiento reales. Finalmente, se realizó un aislamiento exitoso de los constituyentes apolares del extracto de raíces de diclorometano de Angelica archangelica.
Aislamiento rápido de una mezcla representativa de productos naturales apolares mediante Flash-CMS en fase normal
Purificación de una mezcla de productos naturales en columnas flash de fase normal de 12 gy 25 g
Se utilizaron tres estándares disponibles comercialmente (óxido de cariofileno, khellin y alfa-santonina) para evaluar la aplicabilidad del sistema puriFlash-CMS como herramienta para la purificación rápida de compuestos lipofílicos a partir de extractos de plantas crudos.
Los cuatro cromatogramas muestran el perfil de la mezcla a escala preparativa con gradientes rápidos en dos tamaños de columna con una buena superposición de las señales UV y MS.
Todos los parámetros se optimizaron cuidadosamente tanto para la separación como para la detección. Se tuvo especial cuidado para encontrar condiciones de ionización y división que proporcionarían una buena detección y
Purificación guiada por Flash-MS de un compuesto dado
Esquema de la dilución de la bomba de maquillaje posterior a la columna
Sistema puriFlash-CMS
Los solventes de la fase normal son altamente inflamables para la fuente APCI y deben evitarse debido al proceso de calentamiento.
La dilución poscolumna optimizada era obligatoria para tener una ionización eficiente y segura. La mezcla de disolventes cuando alcanzó el detector de EM estaba en> 99% de ACN o MeOH.
La detección por APCI-MS con condiciones de división optimizadas y elución posterior a la columna del disolvente apropiado resultó robusta y muy adecuada para este tipo de purificación.
Purificación puriFlash-CMS de fase normal del extracto de raíces de Angelica archangelica
HPLC-UV analítica
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Escala analítica:
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Escala preparativa:
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Flash preparativo UV-ELSD-MS
Las raíces de Angelica archangelica son ricas en derivados cumarínicos. La detección de MS-ELSD además de la detección de UV permitió el monitoreo de metabolitos secundarios con cromóforos débiles o nulos y la selectividad de la MS fue de gran ayuda para una colección precisa de compuestos parcialmente coeluyentes.
Conclusión
La purificación instantánea en fase normal representa una estrategia eficaz para un aislamiento racional de biomarcadores lipófilos específicos o compuestos bioactivos en función de los resultados del perfil de metabolitos. El fraccionamiento activado por MS y el monitoreo ELSD, además de la detección UV estándar, es una herramienta poderosa para una recolección precisa y para estimar la cantidad de compuestos separados. MS es particularmente útil para la recopilación específica de cualquier m / z en caso de coelución que a menudo ocurre en extractos crudos utilizando metodologías cromatográficas de alta carga y baja capacidad de pico.
Este enfoque rápido y racional se puede utilizar ampliamente para purificaciones de un solo paso y aislamiento de mezclas sintéticas y naturales. También es compatible para la detección de compuestos apolares que carecen de cromóforos, lo cual es muy común en la investigación de productos naturales. La separación realizada a escala preparativa permite purificar decenas a cientos de mg de compuestos para una mayor identificación estructural y evaluación de sus bioactividades.
Referencias
david righi1, Antonio Azzollini1, Emerson Ferreira Queiroz1, Jean-Luc Wolfender1
Facultad de ciencias farmacéuticas, Universidad de Ginebra, Universidad de Lausana, 30 Quai Ernest-Ansermet, 1211 Ginebra 4, Suiza
[1] Davy Guillarme, Dao TT Nguyen, Serge Rudaz, Jean-Luc Veuthey, Eur. J. Pharma. Biofarma. 2008, 68, 430