Ampliación del alcance de las ligaduras mediadas por Sortase mediante el uso de homólogos de Sortase
Western Washington University
Resumen
Las reacciones de transacilación catalizadas por sortasa se utilizan ampliamente para la construcción de derivados de proteínas no naturales. Sin embargo, la enzima más comúnmente utilizada para estas estrategias (sortasa A de Staphylococcus aureus) está limitado por su estrecho alcance de sustrato. Para ampliar la gama de sustratos compatibles con las reacciones mediadas por sortasa, caracterizamos las preferencias de sustrato in vitro de ocho homólogos de sortasa A.
A partir de estos estudios, identificamos las enzimas sortasa A que reconocen múltiples sustratos que no son reactivos a la sortasa A de S. aureus.
Explotamos aún más la capacidad de sortase A de Streptococcus pneumoniae Reconocer un sustrato LPATS para realizar una modificación específica del sitio del residuo de serina N-terminal en el péptido antimicrobiano natural DCD-1L.
Finalmente, observamos inesperadamente que ciertos sustratos (LPATXG, X = Nle, Leu, Phe, Tyr) eran susceptibles de transacilación en sitios alternativos dentro del motivo del sustrato, y sortasa A de S. pneumoniae era capaz de formar oligómeros. En general, este trabajo proporciona una base para un mayor desarrollo de las enzimas sortasa para su uso en la modificación de proteínas.
El análisis de espectrometría de masas se realizó utilizando el Advion Interchim Scientific® exprensaion® Espectrómetro de masas compacto (CMS).